基因工程的研究策略和实践.ppt

基因决定性状 青霉素能产生青霉菌 家蚕能吐出蚕丝为人类利用 定向改造基因的设想 1. 能否让细菌“吐出”蚕丝？ 2. 能否让微生物产生人胰岛素、干扰素等昂贵药物？ 基因工程过程示意图 基因工程的研究策略 一、目的基因的分离( donor DNA ) 二、载体DNA及其改造(Vector DNA) 三、体外DNA重组(DNA recombination ) 四、重组DNA的转化( Transformation) 五、重组体的筛选鉴定与克隆扩增 ( identification clone amplification) 六、目的DNA在受体细胞中的表达(gene expression) 一、目的基因的分离 从cDNA文库中分离目的基因 从基因组DNA文库中分离目的基因 PCR扩增目的基因片段 化学方法人工合成基因 有复制起点，能自主复制； 具有筛选标记，便于重组体的筛选和鉴定； 具有一种或多种限制性内切酶的单一切割位点，并在位点中插入外源基因后，不影响其复制功能； 分子量小，以容纳较大的外源DNA。 表达型载体还应具有与宿主细胞相适应的启动子、增强子、加尾信号等基因表达元件。 三、体外DNA重组 概念： 不同来源的DNA片段共价连接、通过重新组合构成了具有两个DNA分子遗传信息的新重组体DNA分子的过程。 分类： 粘末端连接 平齐末端连接法 同聚物核苷酸末端法