稳定同位素标记技术在生物分子相对定量分析研究中的应用与进展.pdfVIP

2013 年 第 58 卷 第 27 期：2762 ~ 2778 《中国科学》杂志社 评 述 SCIENCE CHINA PRESS 稳定同位素标记技术在生物分子相对定量分析研究中的 应用与进展 ①② ① ② ①* ①* 欧阳玥 , 孙晓红 , 闫静 , 褚金芳 , 闫存玉 ① 中国科学院遗传与发育生物学研究所, 国家植物基因研究中心(北京), 北京 100101; ② 黑龙江中医药大学药学院, 哈尔滨 150040 * 联系人, E-mail: cunyuyan@; jfchu@ 2013-03-06 收稿, 2013-05-29 接受, 2013-08-20 网络版发表 国家自然科学基金和中国科学院仪器设备功能开发技术创新项目(YG2010002)资助 摘要 生物分子参与生命体的整个生命活动周期, 对其进行定量分析是深入研究其生物合成、信 关键词 号通路和生物与非生物胁迫反应分子作用机制所关注的重要问题. 尽管同位素稀释法以其在绝 同位素标记 对定量分析结果精准方面的优势在生物分子定量分析领域得到广泛认可, 但受到同位素内标化 相对定量 合物的限制无法得到广泛应用. 近10 年来同位素标记技术得到迅猛发展, 尤其在定量蛋白质组、 质谱 生物分子 代谢组研究领域. 蛋白质、多肽和其他生物小分子能够通过细胞或组织培养, 或者利用化学手段, SILAC 通过对特定官能团的化学反应实现同位素标记, 如细胞培养氨基酸稳定同位素标记技术(SILAC), ICAT 15N/14N 及相对和绝对定量同位素标记技术(iTRAQ)等实现同位素标记, 并结合色谱/ 质谱技术实 iTRAQ 现目标生物分子的定量分析. 本文对上述同位素标记技术的优缺点进行了系统论述和比较. 基于 高效、高通量和低成本同位素标记技术的生物分子相对定量研究是未来的发展方向, 也是深入了 解各种生命现象分子作用机制的重要手段. 生物分子定量分析是生物学和分析化学领域共 法(isotope dilution)和基于同位素标记技术的相对定 同关注的重要研究内容, 通过对参与调控生物生长 量分析方法能够对目标生物分子进行定量分析. 前 发育过程的蛋白、多肽及重要的信号分子进行定量分 者是通过向分析体系中直接施加稳定同位素(15N, 13C, 2 34 18 析, 可以深入了解生物系统发挥作用的分子机制, 同 H, S 和 O 等)标记的目标化合物, 将其作为内标, 时, 在复杂生物基质条件下准确获取这些极低含量 然后比较内源性目标化合物与内标化合物的 MS 响 重要生物分子的定量分析结果也是分析科学家所面 应来实现目标物质的绝对定量; 后者是通过对生物 临的重大挑战. 样品及对照组分别予以轻质同位素和重质同位素分 目前, 随着质谱(MS)技术的发展和普及, 基于 别进行标记, 然后比较不同标记形式的目标化合物 MS 技术的定量分析方法日益成为生物分子量化关系 在两组样本中的MS 响应差异来实现相对定量. 研究的主流. MS