阳离子脂质体共载siRNA与紫杉醇的制备与性能表征.pdfVIP

2013 年 第 58 卷 第 11 期： 1014 ~ 1020 《中国科学》杂志社 论 文 SCIENCE CHINA PRESS 阳离子脂质体共载siRNA 与紫杉醇的制备与性能表征 ① ①② ①②* ①② ① 陈伟光 , 刘源岗 , 王士斌 , 陈爱政 , 付昕宇 ① 华侨大学生物工程与技术系, 厦门 361021; ② 华侨大学生物材料与组织工程研究所, 厦门 361021 * 联系人, E-mail: sbwang@ 2012-11-20 收稿, 2013-01-10 接受 国家自然科学基金和福建省自然科学基金(2010J05027, 2011J01223)资助 摘要 以十八烷基季铵盐羧甲基壳聚糖(OQCMC)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)和3--N-N′-N′- 关键词 二甲基氨基乙基-氨甲酰基胆固醇(DC-Chol)三种材料, 采用逆相蒸发法(REV)成功地制备了空 阳离子脂质体 白阳离子脂质体(CLP). 以同样方法制备二元CLP-PTX(紫杉醇)、CLP-siRNA、三元CLP-PTX- siRNA PTX siRNA 阳离子脂质复合体; 并用DLS, TEM, AFM, HPLC, GC, CLSM, FCM 及定量凝胶电泳法 制备 对样品性能进行表征. 结果表明, 所制得的阳离子脂质体球形度好、表面光滑、粒径分布均匀, 表征 平均粒径和Zeta 电位分别为73.54 nm 和+63.1 mV; PTX 和siRNA 的载药量和包封率分别为 转染率 166.0 g/mL 和91.9%, siRNA 转染率可达70.74%; 载体中三氯甲烷残留率为5.0 g/mL, 远低 于ICH 规定的上限(60 g/mL). 紫杉醇是目前临床治疗乳腺癌、卵巢癌、非小细 plexes), 再进行包载化疗药物, 便可形成阳离子脂质 胞肺癌等多种肿瘤的最有效的药物之一. 但因紫杉 体-基因-化疗药物三元复合物[10~12]. 阳离子脂质体基 醇(PTX)难溶于水, 所以PTX 注射剂都是以聚氧乙基 因载体与病毒基因载体相比, 具有可大批量生产且 代蓖麻油和无水乙醇组成混合溶媒制成的. 目前 生产成本低、安全性高、可重复性好、生物相容性好、 PTX 改进给药系统的研究报道较多, 纳米给药系统 低免疫源性, 同时可以载入大小达52 kb 的外源基因 (尤其是脂质体) 已成为国内外抗肿瘤药物新剂型的 片段等优点[13~15]. 但缺点是其转染效率仍低于病毒 研究热点. 此外作为抗癌药, PTX 本身具有较大的毒 基因载体[16], 因此研制安全性与转染活性更佳的新 副作用, 为了降低药物使用剂量, 现在越来越多的学 型阳离子脂质体势在必行. 者用阳离子脂质体共载 siRNA 与化疗药物进行联合 本文采用REV 方法制备阳离子脂质体, 所制得的 治疗[1], 特别是应用于多药耐药肿瘤治疗领域. 因为 载体可以作为一种优良共载基因与化疗药物载体体 siRNA 可以沉默相关肿瘤蛋白表达, 以提高胞内药 系. 目前国内外尚未见到此种阳离子脂质体的报道. 物浓度. 阳离子脂质体(cationic liposome, CLP)作为一种 1 材料与方法 新型基因与药物传递系统[2~6], 近年来备受众多研究