基于胶体金技术快速检测试纸条的错误信号的处理精要.docVIP

基于胶体金技术快速检测试纸条的错误信号的处理 -10-15 00:00 ? 来源： ? 点击次数： 关键词： 基于 胶体金技术 快速检测试纸条 错误信号处理 对错误信号的处理和检测操作的优化的系统化处理方法的导言。 在近些年来，体外诊断产业（IVD）增加了巨大的投入来开发基于膜技术的快速检测试纸条。类似的的检测已经应用在临床和非临床领域。在早期的论文中 已有一篇是关于这些方法得到广泛应用的综述。 虽然基于膜技术的快速检测试纸条是相当简单的，但是此方法的实行的效果 依赖于大量的关键参数，在《体外诊断技术》的早期论文中已经探讨了金标液（gold conjugate）的质量和与膜结合的蛋白捕捉的方式的重要性。此篇论文探讨了导致产生假阳性和假阴性信号的错误的检测操作的可能原 因，并且提供了一套解决此类问题和优化检测效能的系统方法。虽然此文章是有 针对性地说明了胶体金检测技术中的相关问题，但是在胶乳检测技术中也能发现类似的问题。 为了避免重复，我们假定读者熟悉快速检测技术的机理和快速检测试剂的基本特性——尤其是抗体、金标粒子、硝酸纤维素膜、结合垫、样品垫和吸收垫——并且熟悉检测中用于处理不同试纸条和硝酸纤维素膜的各种化学试剂。对于不 熟悉这些概念的读者，在其他文章里已经对此进行了详细的解释。 假阳性结果和假阴性结果的特征 假阳性结果是样品中没有待检测物时在检测带上出现了一条彩线（对于金标 而言是红线）。这条线可能在检测的初期或在一段明显的时间延迟之后出现。假 阴性结果是有可检的阳性样品时在抗体捕捉点上没有出现一条可见的线。 假信号可能在许多种样品中发生，也可能仅仅发生在一种特定类型或来源的 样品中。这个问题可能出现于一个单独检测批次的每个样品，也可能仅仅发生于一个样品检测中随机数量的检测带。后一种情况说明了对于整个操作而言在进行下一步前进行每个步骤时对大量检测带的处理的重要性。甚至在整个操作水平时从标准阴性样品中也可能发现假阳性结果，同样对于标准阳性样品亦是如此。由于批次检测失败后的巨大的成本损失，因此在进行达 到大量产生前对假阳性和假阴性结果准确判断和产生原因的了解是必要的。 假阳性和假阴性信号的产生有许多不同的原因。这些信号可能由样品或由检 测技术本身的设计缺陷和操作不当引起。我们可以通过在研制时的每个步骤进行 彻底的、反复的大量的检测装置的试验可以消除产生假信号的潜在因素。 图 1 在抗体和一个胶体金颗粒之间的结合力 当进行检测时，假阳性或假阴性结果产生的原因有时是由信号的观测产生， 也可能由于流动相的特征导致假信号的产生。然而，假信号出现的理由一般并不 经常是显而易见的。我们一般依赖于经验、系统和科学的方法、详细的故障排除 预案可以消除假信号的产生并且组织它们发生。在调整任何特异性参数之前，检 测技术的开发者应当十分熟悉使检测技术更为可靠的因素和可能引起错误的因 素。如果对快速检测技术有了充分的理解，那么没有必要采用经验的方法。 对于基于膜技术的快速检测技术工作机理的详细的描述和对于假阳性和假 阴性结果的详细的故障排除操作手册不在这个篇幅短小的论文讨论范围之内。相 反，此篇论文扼要讲述了对引起这些问题的原因的典型特征并且主要说明了处理 此类问题的方法。 假阳性产生的基本原因 大多数假阳性信号出现的原因是由于相似的问题，即在常规的结合 步骤进行时蛋白与胶体金颗粒特异性 结合。在此过程进行期间，蛋白质被三种主要的力 吸收在胶体金的表面上（图1）。 电荷引力 胶体金颗粒带有负电荷，这是由于在将氯金化钠转化为胶体金时，使用的还原剂（经常是柠檬酸盐） 带有的一层负电荷被吸附在胶体金颗粒的表面。负电荷将吸引带有正电荷的蛋白并且足以使其靠近结合区的表面，这样就有可能发生假阳性。低于等电点的蛋白带有正电荷，因此可能会与胶体金颗粒表面发生强烈的吸引作用。尤其是带有富 含赖氨酸和精氨酸的蛋白区域在低于赖氨酸的等电点（pH 10.4）和精氨酸的等 电点（pH 12.5）时会带有大量的正电荷。 疏水作用力 一旦蛋白质彼此十分接近（之间的距离大约小于 1nm），蛋 白质的任何疏水区很有可能与胶体金表面的疏水区接触并且与之结合。因此富含 非极性氨基酸（例如色氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或苯丙氨酸）的蛋白质 会与胶体金表面发生强结合作用。 配位键结合力 配位键结合力是所有吸引力中最强的结合力。含有大量富含 硫的氨基酸（由于存在半胱氨酸和甲硫氨酸）的蛋白质强结合胶体金颗粒表面。 这是由于在金原子（具有传导带电子的能力）和硫原子（带有价电子）之间的吸 引力造成的。 当这三种结合力作用于金标颗粒上，它们会产生如下所述的假阳性信号并且 由此而对检测技术的效能产生不良的影响。 在采用系统的方法来诊断和消除假阳性信号之前，了解大多数（并不是所有 的）假阳性信号可能