不同性别类型黄瓜ACC合酶基因的单核苷酸多态性标记与酶切扩增长度多态性标记.pdfVIP

维普资讯 生物化学与生物物理进展 ProgressinBiochemistryandBiophysics，2006，33(4)：362-367 WWW．pibb．ac．~11 PI；ll 不同性别类型黄瓜ACC合酶基因的 单核苷酸多态性标记和酶切扩增长度多态性标记 弗 向太和 ” 王利琳 庞基 良 胡江琴 申屠连峰 吴 锴 (杭州师范学院生命科学学院，杭州 310036) 摘要 黄瓜的性别分化与乙烯密切相关，1．氨基环丙烷 ．1．羧酸 (ACC)合酶是乙烯生物合成过程中的关键酶．根据ACC合酶 基因家族的保守序列设计PCR引物，从8个不同性别类型 (雌雄同株、强雌性和全雌性)黄瓜品种中克隆了长度为 1188bp 的ACC合酶基因(CS-ACS2)片段 (GenBank登记号为：DQ115884~DQ115886和DQ115875~DQ115879)．经测序分析，3个 雌雄同株性别类型品种的序列完全相同．与之相比，5个强雌性和全雌性品种中存在8个单核苷酸多态性(SNPs)标记，SNPs 标记为4个A一一G和4个T一一c之间的转换．在8个SNPs中，有 1个SNP位于内含子区域，其余7个SNPs都位于外显 子区域．在 7个位于外显子区域的SNPs中，有3个为非编码区的SNPs，4个为cSNPs．而在4个cSNPs中，有3个导致了编 码的氨基酸序列改变．研究结果表明，与雌雄同株性别类型相比，雌性系中均存在单核苷酸的变异，这提示ACC合酶基因 CS-ACS2的单核苷酸变异可能与黄瓜雌性系的发生形成有关．另一方面，根据SNP多态性还发展了一个酶切扩增长度多态性 fcAp s)标记 C．MT700．利用CAPS标记 C．MT700能将强雌性优 良品种MT．705与其他黄瓜品种相区别，该标记在黄瓜育种生 产上具有一定的应用价值．此外，研究获得的SNPs标记和 CAPS标记丰富了黄瓜的分子标记种类． 关键词 黄瓜，性别类型，1-氨基环丙烷-1-羧酸 (ACC)合酶基因，单核苷酸多态性(sNP)，酶切扩增长度多态性(CAPS) 学科分类号 Q943．2，$642．2 黄瓜不仅是重要的蔬菜作物，而且黄瓜性别表 与黄 瓜 性 别决 定位 点 F紧密 连 锁 ．Mibus和 现复杂多样，也是研究植物性别决定和分化的良好 Tatlioglut“1进一步研究发现F位点编码一个单独的 实验材料 ．黄瓜性别类 型主要有雌雄 同株异花 - ACS1G拷贝，并且 CS-ACS1G与 CS-ACSJ的差 (monoecious)、 全 雌 株 (gynoecious)、 全 雄 株 别 主 要在 启动 子 区域 ．对 于 CS-ACS2基 因 ， (androdioecious)、两性株(hermaphroditic)、雄花两 Kamachi等同研究发现，与雌雄同株性别类型相比， 性花同株(andromonoecious)，雄花、雌花及两性花 CS-ACS2在雌性系中的表达强度要强、时间要早． 同株(trimonoecious)等不同的性别表现类型 ,【21． Mathooko等[51通过 Northern杂交表明CS-ACS2基 据证实，黄瓜的性别决定与乙烯密切相关，乙 因的表达量和表达时间与乙烯诱导纯雌株的第一雌 烯被称为黄瓜的 “性激素”，因此研究乙烯的合成 花出现密切相关．Yamasaki等 l2【】认为．CS-ACS2可 和乙烯信号转导途径对黄瓜性别控制有非常重要的 能与黄瓜性别决定的另一位点M紧密连锁，但 目 意义 ,【41．1一氨基环丙烷 一1一羧酸 (ACC)合酶是乙烯 前人们对 CS-ACS2在黄瓜雌雄花 中表达的差异还 生物合成过程中的关键酶，其控制基因是一个基因 无法给出合理的解释． 家族嘲．1997年 Trebitsh等嘲首次从黄瓜中克隆了 在生产上，黄瓜雌花节位的多少和高低是影响 ACC合酶 基 因 CS-ACSJ．随后 ，Kamachi等 和 产量的主要因素．黄瓜雌性系具有丰产、瓜密等优 Shiomiw报道利用简并引物从黄瓜 中扩增出另外 3 点．并且，利用雌性系制备杂种一代无需人工除雄 个