第一二章蛋白质化学资料.pptVIP

+ + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 水化膜 酸 碱 酸 碱 三、蛋白质的变性和凝固 1、蛋白质的变性** 定义 在某些物理和化学因素作用下，蛋白质的空间构象被破坏，导致其理化性质改变和生物活性的丧失的现象称变性。 原理 连接各级空间结构的次极键发生断裂，导致空间结构解体，但一级结构不变。 变性最主要的标志： 生物学活性的丧失 理化性质的改变： 溶解度下降， 粘性增加， 呈色效应增加， 易被蛋白酶水解。 常见的变性因素 强酸、强碱、有机溶剂、 生物碱、尿素、胍、重金属 化学因素 物理因素 剧烈振荡 热、 紫外线、 超声波、 临床应用 1、利用变性：酒精消毒，高压灭菌，血滤液 制备 2、防止变性：低温保存生物制品（疫苗、酶 制剂等） 若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性(renaturation) 。 牛胰核糖核酸酶的变性与复性 β-巯基乙醇 尿素 透析 有活性 无活性 蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，称蛋白质的凝固。 2、蛋白质的凝固 四、蛋白质的沉淀 * 定义 当破坏了维持蛋白质胶体稳定的因素甚至蛋白质的构象时，蛋白质就会从溶液中析出，这种现象称为蛋白质的沉淀。 蛋白质沉淀的方法 1、盐析法( salting out) 向蛋白质溶液中加入大量中性盐使蛋白质沉淀称为盐析 * 常用的中性盐： 不破坏蛋白质的构象，蛋白质不发生变性。 硫酸铵、 硫酸钠 等 * 概念： * 特点： * 作用原理: 盐离子与水亲和力极强，夺去 蛋白质的水化层，减少分子间静电斥力。 2、有机溶剂沉淀法 使蛋白质脱去水化层,又能降低溶液的介电常数使蛋白质表面电荷减少，导致蛋白质分子聚集而沉淀。 必须在低温下操作 * 注意事项 尽量缩短处理的时间 ，及时将蛋白质中残存的有机溶剂除去 甲醇、乙醇、丙酮 * 缺 点 *原 理 * 常用有机溶剂 常会使蛋白质变性 重金属离子如Cu2+、Hg2+、 Pb2+ 、 Ag+等带有正电荷，能与蛋白质分子中带负电的基团结合，生成不溶性的重金属蛋白盐而沉淀。 3、重金属盐沉淀法 此法常使蛋白质变性失活。 若溶液pH大于蛋白质的pI，沉淀更易发生 * 缺 点： *原 理 生物碱试剂(如鞣酸、苦味酸、钨酸等)，某些酸类(主要指三氯醋酸、磺酰水杨酸和硝酸等)，与蛋白质的正离子结合生成不溶性的盐而沉淀。 4、生物碱试剂和某些酸类沉淀法 反应溶液的pHpI，确保蛋白质以阳离子形式存在 * 缺 点 * 原 理 常引起蛋白质变性 * 注意事项 五、蛋白质的呈色反应 1、茚三酮反应(ninhydrin reaction) 蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。 2、双缩脲反应(biuret reaction) 蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。 六、蛋白质的紫外吸收 由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的OD280与其浓度呈正比关系，因此可做蛋白质定性、定量测定。 一、免疫反应 交换当一类外来的被称为抗原的物质，如多糖、核酸和蛋白质等侵入机体时即引起抗体的产生，这就是所谓免疫反应。 七、蛋白质分子的免疫学特性 抗 原 指凡能刺激机体免疫系统的细胞发生一系列免疫反应，产生抗体或致敏淋巴细胞并能与之反应产物发生特异结合的物质。 定义 某些低分子量的物质可以与抗体结合，但它们本身不能刺激抗体的产生。如果它们与大分子紧密结合，则能刺激抗体的产生。这些小分子物质称为半抗原(hapten)。如青霉素等。 抗体都是免疫球蛋白 IgG立体结构模型 第五节 蛋白质的分类 一、依据蛋白质的组成分类 1.简单蛋白(simple protein) ：又称为单纯蛋白质，这类蛋白质只含由?-氨基酸组成的肽链，不含其它成分 （1）清蛋白和球蛋白：albumin and globulin广泛存在于动物组织中。 （2）谷蛋白(glutelin)和醇溶谷蛋白(prolamin)：植物蛋白。 （3）精蛋白和组蛋白：碱性蛋白质，存在与细胞核中。 （4）硬蛋白：存在于各种软骨、腱、毛、发、丝等组织中，分为角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白和丝蛋 白。 2.结合蛋白(