myocili蛋白对原发性开角型青光眼小梁网细胞fn表达及细胞迁移与粘附的影响.pdf

1 万方数据 目录 摘 要3 Abstract4 英文缩略词表6 引 言7 Myocilin 蛋白对POAG 小梁网细胞表达 FN 及细胞迁移和粘附作用的研究9 一、材料9 二、方法13 三、结果21 四、讨论27 全文结论32 参考文献33 致 谢35 综 述36 福建省自然科学基金（2010J01148）项目 2 万方数据 摘 要 目的 建立原发性开角型青光眼（Primary open angle glaucoma ,POAG ）小梁网 细胞体外原代培养体系；分析不同浓度重组myocilin 蛋白对POAG 小梁网细胞 纤维连接蛋白(fibronectin ，FN)表达及对细胞迁移、粘附功能的影响，探讨 myocilin 蛋白与原发性开角型青光眼发病的关系。 方法 运用组织块培养法，进行体外细胞原代和传代培养，取传3 代的小梁网细 胞分别加入含重组 myocilin 蛋白终浓度为0 ug/ml （对照组）、0.5 ug/ml、1 ug/ml、 1.5 ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml 的无血清培养基，继续培养 24 小时后，运用 Western blot 、Elisa 法分别检测小梁网细胞内以及细胞培养液中 FN 的表达水平；并运 用 Transwell 小室法、CCK-8 法检测 myocilin 蛋白对所培养传3 代POAG 小梁 网细胞迁移、粘附的影响。 结果 1、组织块长出的细胞经倒置显微镜观察、免疫细胞化学抗原表达检测，证 实体外培养细胞为 POAG 小梁网细胞；2 、Western blot 检测结果: FN/ β-actin 比值分别为 33.4 ±1.0、28.9 ±0.8 、21.6 ±0.9、15.9±1.1、11.9±0.8 。0.5ug/ml 组与对照组相比差异无统计学意义(P=0.09 ，P0.05 ）；1.0 ug/ml、1.5 ug/ml、2 ug/ml 、2.5 ug/ml 组与对照组的差异有统计学意义(P 均为0.00，P0.05) 。3、Elisa 法检测各组细胞培养液中 FN 浓度为：0.4654 ±0.0039 ug/ml 、0.4596 ± 0.0032ug/ml 、0.4216±0.0037ug/ml 、0.4214±0.0039ug/ml 、0.4043±0.0039ug/ml 、 0.3806±0.0071ug/ml 。0.5 ug/ml 组与对照组相比差异无统计学意义(P=0.12 ， P0.05 ）；1.0 ug/ml、1.5 ug/ml、2 ug/ml、2.5 ug/ml 组与对照组的差异有统计学 意义(P 均为 0.00，P0.05) 。4 、Transwell 小室法检测结果显示：对照组和实验 组细胞数分别为 16.40±4.0373 ，8.60 ±2.0736 ，实验组细胞迁移数较对照组少， 实验组与对照组的差异有统计学意义(P=0.005 ，P0.05 ）。5、运用 CCK-8 法检 测各组细胞吸光度值的均值分别为 1.9814±0.1624 、1.8848±0.0267 、 1.4895±0.0916、1.4120±0.1087、1.3392±0.1391、1.0310±0.0639 。0.5 ug/ml 组与 对照组相