fk228的提及其对人肝癌细胞hepg2生长抑制的实验研究.pdf

亟±堂位绝窑 垴霆 摘要 目的：探索从紫色色杆菌培养物中分离纯化组蛋自去乙酰化 增殖、凋亡及细胞周期的影响，探讨FK228抗肿瘤作用机制， 为下一步FK228体内实验以及临床应用提供理论依据。 方法：应用过滤、萃取、层析及重结晶等方法从紫色色杆菌 培养物中分离纯化组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228，通过波谱方 法鉴定结构并与参考文献上数据对比；用分离纯化的FK228与 标准品同时进行下列实验：①M丌法检测不同浓度FK228在不 同作用时间对人肝癌细胞HepG2的增殖抑制率；②荧光染色观 察FK228对HepG2细胞形态学改变；③琼脂糖凝胶电泳分析细 和cdk4mRNA表达的影响。 结果：从35升紫色色杆菌培养物中分离纯化FK228，得到 纯品4．84毫克，二者在随后的体外瘤细胞抑制实验中显示出良 甥·Ld能抑制人肝癌细胞HepG2增殖，各剂量组及各时间组之 型的凋亡细胞形态特征；琼脂糖凝胶电泳分析FK228处理后 HepG2细胞DNA，均可见明显的细胞凋亡形成的梯状条带；流 FK228使 式细胞术检测结果显示，16．01．tg·L。和32．01．tg·L。1 亟±堂位淦塞 擅星 期变化无统计学意义；RT—PCR检测显示，FK228作用能明显促 mRNA的表达 进HepG2细胞p21mRNa的表达，同时抑制cdk4 (与对照组比较P0．01)。 结论：从不同于WB968的紫色色杆菌菌株的培养物中分离 纯化出微量的组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228；FK228能明显抑 制人肝癌细胞HepG2增殖，并具有时间．剂量依赖性；FK228能 基因表达的改变可能是FK228诱导HepG2细胞凋亡／周期阻滞及 增殖抑制的重要机制。 关键词：组蛋白乙酰化；组蛋白去乙酰化酶抑制剂；FK228； HepG2；细胞周期 II ABSTRACT the of ofFK228 method Objective：Toexplore preparation fromfermentationof substance genus effectsof violaceuminanutrientmedium．To the investigate novelhistone deacetylase FK228(FR901228，depsipeptide)，a andcell inhuman inhibitor,Oil cycle proliferation,apoptosis cellline hepatomaHepG2． and fromculture Methods：FK228wasisolated