pparγ激动罗格列酮对体外脂多糖刺激的枯否细胞中ⅰκb激酶β表达影响的研究.pdf

中文摘要 PPART激动剂罗格列酮对体外脂多糖刺激的枯否细 胞中IKB激酶p表达影响的研究 摘 要 目的：非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis， NAsH)是以肝细胞脂肪变性、小叶内炎症伴灶性坏死为特 征的一类遗传．环境．代谢应激相关性临床病理综合征，常合 并肥胖、糖尿病和高脂血症，约30％NASH患者可进展为 肝纤维化，甚至肝硬化，而成为隐源性肝硬化的重要原因之 一。目前，NASH确切发病机制尚未完全阐明，最为成熟的 “二次打击”学说认为，胰岛素抵抗(insulinresistance，IR)、 内毒素血症、氧化应激、脂质过氧化及炎症细胞因子活化等 多种因素互相关联，共同参与NASH的病理生理环节。 cells，KCs)虽为肝内固定的巨噬细 枯否细胞(kupffer 胞，但承担着全身单核巨噬细胞系统80％．90％的功能，其 种前炎症介质基因核转录调控因子，通常情况下，大多数 NF．rB与其抑制蛋白(NF．r．B 的二聚体，存在于胞浆中，仅少数处于活化状态，参与维持 细胞生长、抗凋亡等生理功能。在病理状态下，内毒素的主 Bkinase 激酶p(inhibitkappa p，IKKD)，磷酸化降解Ir．B， 中文摘要 移位核内，与DNA上特异性靶基因序列结合，启动、调控 众多细胞因子、粘附分子和炎症相关的酶及蛋白质的表达， 诱导NASH的发生发展。 增敏剂，其通过激活靶组织中特异性受体，即过氧化物酶体 receptor 增殖物激活受体Y(peroxisomeproliferator-activated 1，，PPARy)调节糖、脂代谢，改善胰岛素抵抗；此外亦有研 究表明，PPAIⅥ在KC中也广泛表达，罗格列酮通过抑制 NF—KB的活性，参与调控肝组织炎症反应，但其是否通过 IKKf3信号通路发挥作用目前尚未明确，对于肝脏PPAR7 与IKKl3之间相互关系的研究亦罕见报道。本研究旨在通过 肝脏炎症调控细胞．枯否细胞的体外分离培养，LPS刺激模 拟肝脏炎症反应，并应用PPARy特异性激动剂罗格列酮干 mRNA表达变化，以探讨NASH损 预，观察细胞中IKK[3 伤的分子机制，明确PPAR7激动剂罗格列酮抑制NF．KB活 化的信号通路，为今后NASH的有效防治提供新的思路。 准饲料喂养一周后，采用原位肝门静脉插管，Ⅳ型胶原酶消 化、密度梯度离心以及差速贴壁分离等方法分离、纯化大鼠 肝脏正常KC，细胞得率约为(O．5．1．O)×107／鼠肝，O．4％台 盼兰染色鉴定细胞存活率95％，以2x106浓度接种于6孔 板，并以含10％胎牛血清的RPMI．1640培养基于37℃， 5％COz培养箱培养。其中一孔置于荧光显微镜下观察， 1640 ％明胶稀释20倍)，培养4h后以含10％胎牛血清RPMI 中文摘要 冲洗，倒置相差显微镜下观察细胞浆内吞噬颗粒，鉴定KC 纯度及其吞噬活性90％。余培养孔细胞继续标准培养24h 后随机分为四组(每组12复孔)： a组：正常对照组 b组：LPS 1pg／ml组 C组：LPS 1pg／ml+Ros．109mol／L组 d组：LPS lI．tg／ml+Ros．509mol／L组 标准培养24h后换液，分别加入含相应浓度LPS及罗 48h，倒置相差显微镜下观察细胞形态及吞噬活性变化，收 medium