stat3反义核苷酸治疗实验性结肠炎的研究.pdfVIP

中山大学附属第一医院临床医学博士后出站报告 摘 要 研究目的和背景 克罗恩病(CD)的病因尚不清楚。研究发现，CD发病时，肠粘膜免疫功能 异常，炎症肠粘膜固有层单个核细胞(LPMC)异常激活、激活的LPMC对激活 后细胞凋亡(AICD)抵抗，导致炎症持续。炎症肠粘膜有大量的炎症细胞因子产 生，如TNF一Ⅱ、INF_丫、IL一6、IL一2等，这些细胞因子能激活炎症细胞内的炎症信 号分子，如NF—r．B和STAT等，这些信号分子在细胞核内与炎症分子基因的启动 子结合，调节炎症分子的表达。抑制上述炎症分子机制的正反馈，对相关疾病具 有一定的治疗作用。最近l临床研究发现，作为IL．6的炎症细胞内信号分子STAT3， 可能参与了CD的发病机制。 CD发病时，肠粘膜T细胞异常激活，这些激活的T细胞对AICD存在抵抗。 IL一6受体结合，能诱导炎症肠粘膜T细胞发生凋亡，最近临床研究证实，该抗体 对CD可能有一定的治疗效果。STAT3是IL一6炎症细胞内的信号分子，研究发现， 可能参与了T细胞抵抗AICD的机制。然而有学者认为，STAT3分子在有的免疫 细胞内存在一定的抗炎作用。例如，单核细胞内STAT3基因敲除的小鼠呈现对 CD发病中的作用需要进一步研究。 本实验中，我们在与CD免疫反应类型及病理组织学十分类似的小鼠TNBS 活，研究STAT3参与该结肠炎发病可能的机制，及抑制STAT3表达是否对结肠炎 具有治疗作用。 实验方法 在实验第1天，用o．1m1含2．0TNBS的50％乙醇溶液灌肠，用体重约 mg ml 229的BALB／c小鼠造TNBS结肠炎模型，对照组小鼠仅用0．150％乙醇灌肠。 nmolSTAT3 实验第3天，用15 ASON或错配反义寡核苷酸(MMAS)灌肠治疗。 每天记录小鼠体重。 实验第7天处死小鼠，分离炎症最明显处的结肠组织，用4％甲醛固定，HE 染色，显微镜下观察组织学形态。 中山大学附属第一医院临床医学博士后出站报告 自新鲜的结肠组织中分离出LPMC，经annexinV和PI染色后，流式细胞仪 LPMC细胞总蛋白，Western 凋亡相关蛋白bcl．2、bax等。 分别用免疫荧光、Westernblot等方法检测每组小鼠结肠炎症组织STAT3、 组织MPO活性。 实验结果 1．免疫荧光检测显示，STAT3主要表达于对照组肠粘膜LPMC和少许隐窝上 ASON灌肠治疗后，炎症肠粘膜LPMC表 LPMC表达STAT3、pSTAT3。用STAT3 的影响不明显。 结肠炎小鼠体重较未治疗组有所增加，并在第6天体重增加与TNBS组相比有显 4- 0．77 4-0．81 g，P=0．036)，和MMAS组(18．24g，P=0．042)。 实验第7天，组织学观察TNBS结肠炎小鼠炎症肠组织充血、水肿、糜烂、 溃疡，粘膜杯状细胞缺失，肠壁增厚，大量炎症细胞浸润，组织学评分为3．36士O．45。 STAT3 ASON治疗能明显减轻炎症结肠组织的炎症程度，和组织学损伤指数，组 织学评分为2．87士0．42，明显低于TNBS组(P=0．叭8)。 组织MPO活性低于TNBS组、MMAS组(P=0．045、O．052)。 平分别为：46．5士13．8 pg／g、502．6士94．2pg／g、612．5士83．7pg／ga pg／g、623．2土64．0 的表达水平分别为：84．8士22．5 p∥g、587．3士77．9p∥g、496．6士90．2p∥g、572．4士 69．9 组(P=0．038和0．046)。 4．STAT3