lhon家系中粒体dna11778位点突变比例与发病的关系.pdf

臻婴塞蠢童线蕉篷il△l疆2§壁鑫塞变驻笾蔓筮壅黧豢囊 虫塞翁墨 LHON家系中线粒体DNAl1778位赢 突变比例与LHON发病的关系 中文摘要 Leber’S遗传性视神经病【LeberOptic heritaryNeuropathy，LHON】是 德国Leber医生于1871年首先报j麓的眼科遗传瘸。临床表现为青年人双眼先后 惫牲或驻急瞧进行毪审心毒雯力下辫，最终撬毒孛缝溪壤，是l瑟感雨辩l医疼誊凳戆一 种青年人的疾病。研究发现：该病的遗传方式不符合孟德尔式遗传，均为女性垂 直传递的，至今尚未发现男性患者把本病传递给后代，提示该瘸是与母系遗传有 关懿绥爨矮遗绪病。黧跫LHON终为一稳母系遗镣淫疾病，它瓣遗传方式秘蠢翊 细胞质遗传所不能解释的一些特点：l、男性发瘸远多于女性，约4—7：1“’；2、 女性发瘸年龄晚于男性6—30年且症状更重。’；3、众多的朱发病者有较高的线 粒薅DNA(蕾itoe幻n螽i鑫l 皆发病。在含有mtDNAl1778突变的个体中，男性的发病率50％，女性的发病率 核蓥嚣遗蕊，不完全终显，x一镶戆矢活，缝笈稳突交帮环凌颡素。本课题整限 于不完全外显机制的研究，将目前最新的荧光定缀PCR技术结合Taqman-MGB荧 1t778m 光探针，实时监测每个反应循环，定量检测突变LHON 4|cDNA的比例。其 磊豹茬子探讨个俸豹突变毪穰与发瘸之溺静关系。 本课题分二个部分： 一、HA--SSCP方法秘荧竞定豢PeR方法检潮LHON家系mtDNAGIl778A谴点 突变 l、实验方法 i!麴＆塞基奎缮蕉篷￡隧iiZZ§焦点塞童毽翅兰塞塞趁釜爨 主塞鞭薹 analyMs，异源双链分析；Single 本研究采用HA--SSCP方法(Heteroduplex strandconformation 17个LH0邮日性家系：共15个先证者，71个母系亲属及20个正常人的线粒体DNA的 i1778位点有无突变； 2、实验结果 两条吴鬻祭带，4个鸯系亲藩电泳表瑷蘑条条带，1个母系紊溱及20令聂常入豹电 泳表现两条正常条带； 29，30，33-36，47表现为突变mtDNA70％，正常mtDNA30％； 3、蜜狻结论 11778 l、HA—SsCP方法梭测15个先证糟及66个母系亲属的表现为100％mtDNA l 位点G突变成A；另雏4个母系亲属表现为部分mtDNA1778位点G突变成A，滩分 mtDNA1 I 1778位点未发燕突变；i个每系亲属及20个正常入的mtDNA1778均朱发 现突变。11A—sscP是目前较常用的定性检测mtDNA11778位点突变的方法； 2、荧光定量PCR方法实现了每一轮獯环均检测一次荧光镄号匏强度，艉梭溅 出个体mtDNA 针定量检测mtDNAll778位点突变技术不仅实现TLHON的检测从定性到定量的飞 跃，两虽与罄规PCR褶魄，它具有特黪蛙更强、有效鼷凌PCR污染阀题、叁麓豫程 度高等特点； 二、LHON家系孛臻较髂DNAll778整点突变魄镶与LHON笈疲戆关薏 1、实验方法 11778位点突变比例，依据家系的发病规律分析mtDNA突变比例与发病的关系； bHQⅨ囊丕生线挺焦＆姓l!!Z8僮直塞变￡E倒量筮瘪的差丕 生毫擅疆 2、实验结果 (1)收集的家系中，发病的比例男：女=5．38：l，收集的m样中发病年龄 的比例男：女=16。7：21．5； (2)4个家系检测mtDNA117