乳腺癌腑下淋巴来源的dc对特异性ctl体外杀伤活性的影响.pdf

中文摘要 乳腺癌腋下淋巴结来源的Dc对特异性CTL 体外杀伤活性的影响 摘 要 目的：树突状细胞(dendritic cell，DC)作为唯一的专职 cell，APC)，处于免疫反应 抗原递呈细胞(antigenprocessing 的中心地位。非成熟的DC捕获抗原后被激活为成熟的DC， 其分子表面表达MHC—I类分子、MHC．II类分子、共刺激 胞分泌细胞因子，产生Thl型免疫应答而发挥抗肿瘤作用。 本实验从乳腺癌患者腋窝引流淋巴结中分离单个核细胞，用 自体乳腺癌细胞冻融抗原负载DC，刺激从腋下引流淋巴结 中分离、并以rhlL一2诱导培养的肿瘤区域引流淋巴结细胞 (TDLNC)，使之成为具有针对靶细胞特异杀伤活性的CTL， 并检测其在体外针对自体乳腺癌细胞及MCF．7细胞的杀伤 效应，分析分化诱导的DC的功能和CTL的杀伤特异性，以 期建立一种乳腺癌个体化的治疗方法。 方法： 1．严格无菌摘取淋巴结1-2枚，用机械法获取淋巴细胞 悬液，并用淋巴细胞分离液分离出其中间白膜层单个核细 胞，以含有10％胎牛血清的RPMI一1640培养基重悬、培养。 中叉摘要 rhIL。4(200u／m1)_手D 细胞，加入rhlL．2(200u／m1)培养为TDLNC。 3．用酶消化法自乳腺癌组织块中制各自体乳腺癌细胞， 并用自体乳腺癌细胞冻融抗原负载DC，后者和TDLNC共 培养，以诱导抗原特异性CTL。 4．分别于第l天和第7天收获DC，加入PE．CDla、 细胞表型。于第7天和第10天收获TDLNC，分别加入 其细胞表型。 5．用非放射性细胞毒分析试剂盒，测定各组不同方法诱 导的CTL细胞对自体乳腺癌细胞和MCF．7细胞的杀伤活性， 从而分析分化诱导的DC的功能和CTL的杀伤特异性。 结果： 1．乳腺癌患者腋下引流淋巴结中的单个核细胞用细胞因 成熟DC形态特点的细胞。 ±圭塑兰 细胞相比较，诱导后CD4+细胞含量无明显升高，P0．05。 组对自体乳腺癌细胞的杀伤率明显增高，三组间比较p 胞对MCF．7细胞的杀伤率无明显差异(P0．05)。 结论： 1．乳腺癌患者腋下引流淋巴结中的单个核细胞，在 TNF—a的诱导下，可以诱导培养出具有典型细胞学形态特征 的成熟DC。 2．成熟的DC表面高表达其特异性表面标志物，并具有 较强的抗原提呈功能，可以促进TDLNC增殖、分化为具有 高度杀伤效应性的CTL。 3．经自体乳腺癌细胞冻融抗原刺激诱导的DC可以使 TDLNC增殖、分化为肿瘤抗原特异性CTL，针对自体乳腺 癌细胞具有较高的杀伤效应，而对其他类型的肿瘤细胞不具 有特异性杀伤效应。 4．未经自体乳腺癌细胞冻融抗原刺激诱导的DC虽也可 乳腺癌细胞的特异性杀伤效应，其对自体乳腺癌细胞的杀伤 活性与以rhlL．2培养的TDLNC相同。 5．从乳腺癌患者腋下引流淋巴结中的单个核细胞以细胞 因子与自体乳腺癌细胞冻融抗原联合刺激诱导DC，并激发 中文摘要 TDLNC成为肿瘤特异性杀伤作用的CTL，用以杀伤自体乳 腺癌细胞是一种可行的方法。 关键词：乳腺癌；肿瘤引淋巴结；细胞因子：树突状细胞； 特异性细胞毒T淋巴细胞 薹查塑墨 TheInfluenceofDCfrom Nodeof AxillaryLymph BreastCancertothe ofthe Activity killing Specific CTLinVitro