第二章发酵菌种选育资料.pptVIP

第二章 菌种选育 第一节 菌种的分离与筛选 样品采集 增殖培养 纯种分离 生产性能测定 1、用于大规模工业生产的菌种要求 (1)能在廉价原料制成的培养基上迅速生长并生成所需代谢产物产量高的菌株； (2)可以在要求不高、易于控制的培养条件下迅速生长和发酵，如糖浓度、温度、pH值、溶解氧、渗透压，且所需酶活性高； (3)生长迅速、代谢速度快； 2、分离与筛选的设计要求 菌的营养特征 菌的生长温度应选择高于40℃的菌种 菌对所采用的设备和生产过程的适应性 菌的稳定性 菌的产物得率和产物在培养液中的浓度 容易从培养液中回收产物 定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培养条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 分离：利用分离技术得到纯种。 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。 典型的微生物采样和筛选方法 （一）采样 1、采样对象 以采集土壤为主。一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主；富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。采样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等。 2、采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好。 采土方式：在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步分批寄回，以便及时分离。 （二）增殖培养 为了容易分离到所需的菌种，让无关的微生物至少是在数量上不要增加，可以通过配制选择性培养基，选择一定的培养条件来控制。 例如碳源利用的控制，可选定糖，淀粉、纤维素，或者石油等，以其中的一种为唯一碳源，那么只有利用这一碳源的微生物才能大量正常生长，而其它微生物就可能死亡或淘汰。这样对下一阶段的纯种分离就会顺利得多。 （三）培养分离 尽管通过增殖培养效果显著，但还是处于微生物的混杂生长状态。因此还必须分离，纯化。纯种分离的方法有划线分离法、稀释分离法。 分离微生物的培养基要因微生物不同而定，必要时还要加入一些选择性的抑制剂，如抗生素、酚、孟加拉红等，抑制不需要的微生物的生长。一般来讲，霉菌多采用马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基；酵母菌用麦芽汁培养基；细菌则多用牛肉膏蛋白胨培养基。 （四）纯化、筛选 这一步是采用与生产相近的培养基和培养条件，通过三角瓶的容量进行小型发酵试验，以求得到适合于工业生产用的菌种。筛选有初筛和复筛。 初筛 初筛一般在培养皿固体培养基平板上进行。在培养皿上接种所分离的微生物，经过培养观察其生理效应，如变色圈、透明圈、生长圈或抑菌圈等的大小，进行初步测定。例如筛选柠檬酸产生菌时，可以把分离并经鉴定的宁佐美曲霉接种到含有溴甲酚绿的淀粉培养基上，经培养后，根据菌落周围变成黄色的圈的范围可以初步确定是否有柠檬酸生成。再例如，筛选某种抗生素的产生菌，就用这种抗生素的敏感菌加入到培养这种候选菌的培养基中制成 复筛 复筛是对初筛所得微生物再做进一步精细地测定。测定的方法可根据筛选微生物和实验目的而不同，有固体培养法、液体培养法。 应和生产发酵的条件比较接近，所筛选的微生物较适合于生产扩大培养，所测得数据具有实用意义。 培养分离中要解决的问题 1、分离什么和从哪里分离出? 2、必须充分考虑所分离微生物的生产能力、生长速度、生物群体培养和产品生产工艺及其提纯的难易和费用，工业生产发酵罐中稳定性及遗传操作的难易程度等。 3、选择适宜的培养分离方法和检测方法。 毒性试验 　　自然界的一些微生物是在一定条件下产毒的，将其作为生产菌种应当十分当心，尤其与食品工业有关的菌种，更应慎重。据有的国家规定，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌作为食用无须作毒性试验外，其他微生物作为食用，均需通过两年以上的毒性试验。 第二节 微生物选育 一、自然选育 自然选育是微生物菌种选育的手段之一，也是菌种选育的经典方法。它是利用微生物在一定条件下产生自发变异，通过分离、筛选，排除劣质性状的菌株，选择出维持原有生产水平或具有更优良生产性能的高产菌株。 （一）菌种退化变异的原因 （1）遗传基因型的分离 （2）自发变异的产生 　　自发变异是不定向的，多数为负向变异。其结果是目的代谢物产量下降，生长速度变弱变慢、孢子形成能力低下等。造成变异的原因是多方面的，如长期保藏，频繁的传代，菌体在代谢过程中产生具有诱变作用的物质，诱发DNA结构的改变。DNA中存在的增变基因也可能诱发