人血小板源性生因子基因b转染体外培养猫角膜内皮细胞的生物学效应.pdfVIP

人PD6F—B基因转染体外培养猫角膜内皮细胞的生物学效应 中文摘要 证明人PDGF—B基因不仅能在体外培养的猫角膜内皮细胞中得以表达并具有促进该 细胞分裂再生的作用，为人角膜内皮病的基因治疗提供依据。方法：一、采用逆转 真核表达载体上，构建重组真核表达载体pcDNA。一PDGF—B，转入JMl09大肠杆菌感 受念细胞，筛选、酶切鉴定及计算机自动序列分析证明该基因为目的基因。二、组 织块培养法简捷、快速体外培养出纯净的猫角膜内皮细胞单层，通过细胞形态学观 察、神经特异性烯醇化酶(NSE)单克隆抗体免疫组织化学染色及扫描和透射电镜观 方法分别在基因水平和蛋白水平检测目的基因在该细胞中的瞬时表达情况。四、转 比例，制作体外培养猫角膜内皮细胞的定量损伤模型，统计学分析转染人PDGF一8基 因对猫角膜内皮细胞DNA合成的影响和对猫角膜内皮细胞定量损伤后愈合的影响。 五、利用重组质粒转染细胞的抗新霉素特性，经G418最小致死量筛选出抗性细胞克 隆，免疫组织化学染色观察该细胞表达人PDGF-B基因情况。结果：一、从健康产 妇胎盘组织中能克隆出入PDGF-8基因，经计算机自动测序证明所克隆基因与基因文 库中报道的人PDGF—B基因序列一致。二、组织块法行猫角膜内皮细胞的体外培养简 单、方便，