头部亚低温对大全脑缺血再灌注血脑屏障损伤的影响.pdf

中文摘要 头部亚低温对大鼠全脑缺血／再灌注 血脑屏障损伤的影响 摘 要 目的：观察局部亚低温对大鼠全脑缺血／再灌注 brain (ischemia．reperfusion)lnl脑屏障(blood 伤有保护作用，进一步探索亚低温保护血脑屏障的机制。 方法： l实验分组及动物模型的制备 验动物中心提供)，月龄2～3个月。随机分为3组，假手术 组(S组)、缺血／再灌注组(R组)、亚低温组(H组)，每组 16只。S组：暴露股动静脉，只分离双侧颈总动脉，经枕骨 大孔腹侧开颅暴露基底动脉第二无血管区，穿线但不阻断。 min R组：采用3血管阻断法阻断双侧颈总动脉、基底动脉10 后再开放。H组：采用3血管阻断法阻断双侧颈总动脉，基 底动脉i0min后开放，再灌注前即刻经股静脉输注10℃ 3．5ml生理盐水，同时冰袋冷敷头部，用60w白炽灯距离大 鼠约37cm高度直接照射身体，通过调节灯至身体的距离及 头部冰块的数量和面积使鼓膜温度在lmin内降至32～34 min内恢复并维持在36．5～37．5 ℃，直肠温度同时降低，20 ℃。低温持续时间为3h，3h后仍用白炽灯照射身体缓慢复 温。除低温组外，其余各组于相应时间点腹腔内注射等量的 再灌注后lOmin(T。)采集股动脉血监测动脉血氧分压和二 中文摘要 氧化碳分压。 2标本的采集及检测方法 2．1大鼠脑组织内MMP一9的浓度的测定 48只雄性SD大鼠于再灌注12h，每组随机抽取8只首 先水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，断头处死大鼠，完整取出脑 组织，右侧大脑除去额叶皮质其余脑组织制成匀浆，以 按照大鼠脑组织匀浆MMP-9酶联免疫试剂盒说明书要求测 定各浓度标准品的吸光度，绘制标准曲线，求得回归方程。 根据回归方程最后求得每个标本的MMP一9浓度。 2．2大鼠脑组织含水量的测定 完整取出脑组织后，去除中脑、脑桥、垂体等留取左侧 大脑组织，用滤纸吸干表面水分后置于干燥小瓶中，一20C 含水量作为脑水肿程度的判断。计算方法：脑含水量(％) 100％。 =(湿重一千重)／湿重X 2．3大鼠每克脑组织内伊文思蓝含量的测定 每组其余8只雄性SD大鼠于再灌注12h用10％水合氯醛 再次麻醉大鼠，经股静脉注入2％EB生理盐水溶液(4ml／kg) lh后开胸，通过左心室灌注室温生理盐水(灌注压为110 mmHg)，直到右心房流出的液体无色为止断头取脑。去除小 脑及脑垂体留取双侧大脑组织剥离干净软脑膜、血凝块，称 重，匀浆，放入其4倍体积甲酰胺的离心管中，加上橡皮塞 测。 2．4光镜观察皮质的病理学改变 取右侧大脑额叶同一部位，切取3ram×3mm的组织块， 中文摘要 冷盐水冲洗后置于4％多聚甲醛中浸泡过夜，在10X40倍光 镜下观察皮质的病理学改变。同一位置按照“快、小、轻、 immX 准”原则在冰盘上切取ImmX imm的组织块于4％戊二醛 中固定，4℃冰箱中保存lh以上，送电镜室在透射电镜下观 察BBB的超微结构的改变。 结果： 1各组间体重、月龄比较差异无统计学意义(乃0．05)。 2在股动脉置管后脑缺血5min(T。)、脑缺血i0min(T。)、 再灌注后15min(T3)血气指标比较差异无统计学意义 (PO．05)。 3大鼠脑组织内MMP-9浓度的测定 R组脑组织内lI眦P一9浓度明显增高(尺0．05)；与R组相比， H组脑组织内MMP-9浓度明显降低(PO．05)。 4大鼠脑组织含水量的测定 脑组织含水量明显增高(尺O．05)；与R组相比，H组脑组织 含水量明显降低(PO．05)。 5大鼠每克脑组织内伊文思蓝含量的测定 组相比，R组每克脑组织内伊文思蓝含量明显增高(PO．05)； 与R组相比，H组每克脑