应用变性高效液色谱方法研究急性白血病flt3、dck基因突变.pdfVIP

应用变性高效液相色谱方法研究急性白血病FLT3、 DCK基因突变 研究生：彭娟红 导师：胡建达教授 摘 要 kinase，DCK)和 目的对急性白血病患者的脱氧胞苷激酶(deoxycytine kinase3)基因进行基因突变检测，以明确急性白血病患 FLY3(Fins—liketyrosine 者的DCK和FLT3基因突变情况，并观察基因突变的临床意义。 tandem 基因外显子14和15中内部串联重复(internal 况。2、应用变性高效液相色谱(denaturinghigh-performanceliquid DHPLC)～异源双链分析(heteroduplex 的FLT3基因第11号外显子到第24号外显子之间的序列进行基因突变筛查， 对疑有突变的PCR扩增片段进行DNA测序，以明确突变位点及类型。 结果 测序证实其编码序列的(第3号外显子)第523位核苷酸C／T杂合突变，导致 第122位的脯氨酸(P)被丝氨酸(S)取代。这个位点突变目前为止未见文献 报道。复发3例中2例均已化疗两个疗程仍未缓解，1例死亡。初治2例中l 例化疗一个疗程后未完全缓解出院，1例为门诊病人没有追踪到。因资料不完 整，这些数据还不足以表明其与临床的关联性。 高于阴性组(JpO 图谱异常，都为同一峰型，选取其中7例测序证实为第1740位核苷酸A／G杂合突变。 一种峰型为低矮双峰，6t90患者中选其中4例进行测序，证实有核苷酸改变，第 2560位核苷酸C／A杂合突变，导致第835位氨基酸天冬氨酸被酪氨酸取代 (D835Y)；另一种峰型为三峰，1例患者出现这种峰型，测序显示第2580位核苷 酸T／G杂合突变，结果导致第841位氨基酸天冬酰胺被赖氨酸取代(N841K)。 结论 1、DCK基因的523位核苷酸杂合突变导致了氨基酸的替代，并且此突变 位点到目前为止国内外文献均未见报道。 子标志。FLT3基因N841K突变，目前国内文献还未见报道。 3、用DHPLC筛查点突变其准确性和敏感性都有较大优势，可以极大提高 选择性DNA测序的效率。DHPLC对于检测新的点突变是一种很好的方法，作 为一种高效、简便、经济可靠的基因突变筛选方法，适合于大规模的基因突变 筛查。 关键词：DCK基因：FLT3基因：急性自血病；变性高效液相色谱；突变 ——————————————————————————————————————一 leukemia ofFLT3andDCKMutationsinAcute Study gene HPLC byDenaturing Postgraduate：PengJuanhong Jianda Supervisor：Prof．Hu Abstract offunctional acommon objective1．Deficiency deoxycytidinekinase(DCK)is characteristicforresistanceto ofDCKhave cytarabine(Ara-C、．Mutationsgene beenshowntobe forDCK invitro