开口箭乙醇提取物诱导肝癌细胞HepG2凋亡活性研究.pdfVIP

中南药学 2014年 8月第 12卷 第 8期 CentralSouthPharmacy．August2014．Vo1．12No．8 开 口箭乙醇提取物诱导肝癌细胞 HepG2凋亡活性研究 谢锦艳 ，许苗苗 ，刘银环 ，宋蓓 ，刘越 ，刘海静 ，宋小妹 (1．陕西中医学院药学院，陕西 咸阳 712046；2．陕西省食品药品检验所，西安 710065) 摘要：目的 探讨开口箭根部 乙醇提取物 (ERT-95)对肝癌细胞HepG2生长的影响及其抗肿瘤作用的可能机 制。方法 采用MTT法绘制HepG2细胞生长曲线 ，检测ERT-95对HepG2细胞的生长抑制作用；采用光学显 微镜观察HepG2细胞的凋亡形态变化；采用Hochest染色原理检测HepG2细胞凋亡情况；采用Westernblot检 测CytC蛋白的表达；采用caspase活性检测试剂盒检测caspase．3、caspase．9的活性变化：采用DNAladder凝胶 电泳技术检测DNA的裂解情况。结果 MTT结果显示，ERT-95对HepG2细胞的抑制作用呈剂量依赖性 (／Q 为52．57gg·mL )；光学显微镜下，处理组细胞 出现皱缩、变圆等形态变化 ：Hochest．33258染色后的处理组 细胞呈现典型的凋亡结构；Westernblot结果显示，随着药物浓度增加，CytC蛋 白表达上调；caspase活性检测 显示，caspase-3、caspase-9活性逐步升高；与对照组相 比，处理组琼脂糖凝胶电泳图谱出现DNA条带。结论 ER195有显著的体外促肿瘤细胞凋亡作用，初步研究其促肿瘤细胞凋亡机制是通过线粒体释放 cVtc，进一步 活化 caspase一9和 caspase．3而激活内源性核酸内切酶 ，导致 DNA裂解而实现的 关键词 ：开 口箭 ；抗肿瘤；机制 ；肝癌细胞HepG2 中图分类号 ：R285，R965 文献标识码：A 文章编号 ：1672．2981(2014)08—0735—05 doi：10．7539~．issn．1672-2981．2014．08．004 Antitumoreffectofethanolextractfrom therootofTupistrachinensis Baker．onthelivercancercelllineHepG2 XIEJin-yan，XUMiao-miao，LIUYin．huan，SONGBei，LIUYue，LIUHai-jing，SONGXiao．mei(1．Schoolof Pharmacy，ShaanxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，XianyangShaanxi712046；2．ShaanxiFood andDrugInspectionOffice，Xi’an 710065) Abstract：ObjectiveToobservetheantitumoreffectofethano1extractrfomtherootofTupistrachinensisBaker． (ERT-95)onthelivercancercelllineHepG2．andtoexploreitspotentialmechanisms．MethodsThegrowth curvesandthecytostaticeffectOfEI 95ontheHepG2cellswereevaluatedbyM TTassay．Themorphological changesinHepG2cellswereobservedbyopticalmicroscopes；EI 95inducedcellapoptosisdeathonHepG2 cellswasmeasuredbyHochest33258staining．TheeffectonexpressionsofCytochromeC(CytC、proteinin HepG2cellsweredetectedbyW esternblot．Caspase．3andcaspase一9activitiesweremeasuredwithcaspase activityassaykit．TheinfectedcellswereexaminedforDNA fragmentationbyagarosege1electrODhOresis．Results MTTassayshowedthatE r．95wasabletoin