fez1lzt1基因在乳腺癌中的表达及启动子区域甲基化的研究.pdf

中文摘要 乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，其发病率呈持续和明显上升的趋势。现已公 认肿瘤是一种基因病，研究与恶性肿瘤相关的关键基因，不仅可以更加清楚的了 解肿瘤的发生发展机制，而且为最终攻克癌症奠定坚实的理论基础。 FEZl／LZTSl基因在许多正常组织中普遍表达，但多项研究表明该基因在50％以 上的肿瘤细胞中有改变，说明FEzl／LZTSl基因可能在多种肿瘤的发生发展中起 原发性乳腺癌中均不表达，说明该基因的改变与乳腺癌有更加重要的关系。但是 作为抑癌基因的FEZl／LZTSl基因的失活机制尚未阐明。传统观点认为抑癌基因 的失活是由基因突变、染色体缺失而导致的，但是多项研究表明FEZl／LZTSl基 因在多种肿瘤中突变罕见，说明突变可能并不是FEzl／LzTsl基因失活的主要机 制。近年来作为表遗传学最常见事件的DNA异常甲基化已成为研究基因沉默的 焦点。因此本研究从FEZl／LZTSl基因及其蛋白在乳腺癌中的表达入手，深入阐 述FEzl／LZTSl基因在乳腺癌发生发展中的作用，并对该基因启动子区域的甲基 化状态进行检测。 第一部分FEZl／LZTSl基因mRNA在乳腺癌组织中的表达 材料和方法： 新鲜冻存乳腺癌组织及每个病例相应的癌旁正常组织各50例，分别提取癌 的表达。 结果： 的表达明显下调，差异有显著性(卢0．000)。 2．乳腺癌组织FEZl／LZTSl基因mRNA表达的缺失／下降与淋巴结转移显著 FEZI／LZTSl基因mRNA表达正常组，差异有统计学意义(P--0．032)。 小结： 1．FEZl／LZTSl基因在原发性乳腺癌组织中明显发生改变，说明 FEZI／LZTSl基因在乳腺癌的发生发展中起重要作用。 移。 mRNA表达的关系 实验一．Fezl／Lztsl蛋白在乳腺癌组织中的表达 材料和方法： 白的表达进行检测。 结果： 1．Fezl／Lztsl蛋白在正常乳腺导管上皮中全部表达，蛋白定位于胞浆，呈棕 黄色颗粒状。 例阴性(一)。 3．Fezl／Lztsl蛋白表达的缺失，下降与淋巴结口移显著相口口口0．05)，尤其 是Fezl／Lztsl蛋白表达阴口(一)组及弱阳性(一／+)组淋巴结转移率明显高于 强阳性(+)及中度阳性(+／一)组，差异有统计学意义(尸O．05)。 (P--0．000)。 实验二．FEZl／LZTSl基因编码区突变的检测 Ⅱ 材料和方法： 新鲜冻存乳腺癌组织2例，提取癌组织DNA，采用PCR．测序方法对 FEZl／LZTSl基因编码区的突变进行检测。 结果： 在2例中均发现相同位点的3个点突变，分别为：1．第912位碱基G—A 及第1992位碱基突变为无义突变；第1516位碱基突变导致第468位的氨基酸残 基天冬酰胺(N)转变为天门冬氨酸(D)。 小结： 1．Fezl／Lztsl蛋白在原发性乳腺癌组织中明显发生改变，这种改变可能主要 发生在乳腺癌的进展期。 2．Fezl／Lztsl蛋白表达的缺失，下降可能促进乳腺癌细胞的浸润转移，尤其是 Fezl／Lztsl蛋白表达的细胞数小于50％时更有意义。 3．FEZI／LZTSl基因mRNA与Fezl／Lztsl蛋白表达显著相关。 其意义有待于进一步研究。 第三部分乳腺癌细胞系中FEZl／LZTSl基因启动子区域甲基化状态 材料和方法： 提取11例乳腺癌细胞系DNA，运用重亚硫酸盐处理基因组DNA．PCR扩增 ．直接测序的方法对FEzl／LZTSl基因启动子区域的甲基化状态进行检测。 结果： 在甲基化。在一共28个可能发生甲基化的CpG岛的5’胞嘧啶(C)位点，每个 位点均至少在一个细胞系中发生了甲基化，甲基化频率为00／o-．100％，平均甲基 化频率为65．26％。 小结： 乳腺癌细胞系中FEZl／LZTSl基因启动子区的甲基化程度非常高，平均甲基 化频率为65．26％。 iil 结论： 1．FEZl／LZTSl基因及其蛋白在乳腺癌的发生发展中起重要作用。 2．FEZl／LZTSl基因mRNA及其蛋白表达的缺失／下降可能促进乳腺癌细胞 的浸润转移。 3．乳腺癌细胞系中FEZl／LZTSl基因启动子区域的甲