stat1和hax基因shrna慢病毒载体构建及食管癌细胞体外转染.pdf

目 录 ／必嬲必 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………3 外转染 前言…………………………………………………………………5一再lJ舌 ………………………………………………………………… 材料与方法……………………………………………………………7 结果…………………………………………………………………19 附图 …………………………………………………………………22 附表…………………………………………………………………39 讨论…………………………………………………………………40 结论…………………………………………………………………44 参考文献………………………………………………………………45 致谢………………………………………………………………………65 个人简历…………………………………………………………………66 中文摘要 STAT 1和H2AX基因shRNA慢病毒载体构建及 食管癌细胞体外染 摘 要 食管癌TE一13、ECAl09细胞放射敏感性的影响提供理论基础。 成包含正、反义序列的互补单链DNA，同时设计一个无义对照序列。退 RNA4和pGCSIL-H2AX—shRNA 采用western 质粒RNA的干扰效果，筛选出RNA干扰效果最佳的质粒，将干扰效果 最佳的质粒与慢病毒包装质粒混合物共同转染293T细胞48h后，收集上 Real．Time 1 PCR和western 细胞核内STATl和H2AX斑点形成的变化。 结果：①成功地将STATl和H2AX shRNA转 并经细菌转化扩增后，再提取质粒DNA；②STATl和H2AX RNA3、pGCSIL—STAT 1、pGCSIL- l3 中文摘要 细胞系较空白对照组分别下降了75％、60％、26％、22％和81％、56％、 细胞，转染后8h更换为完全培养基，培养48h后，再收集富含慢病毒颗 粒的细胞上清液，对其浓缩后得到的高滴度慢病毒浓缩液收集上清并过滤 PCR和western 表达的食管癌细胞株；④对转染细胞株采用Real．Time 63％；⑤用转染的食管癌细胞株应用激光共聚焦显微镜检测细胞核内斑点 斑点的形成明显减少。 结论：采用质粒连接的STATl和H2AX 细胞后，其目的蛋白的表达均被明显抑制，成功构建了STATl和H2AX 的形成明显减少。 关键词：食管癌／放射治疗；照射／放射敏感性；砒蛆干扰；STATl／H2AX 2 英文摘要 Constructi and‘dentificalandidenticationionofofrerecombinedombinedS忑姆1’lA『111and H2AX—shRNA lentivirusandtransfectionof esophageal ●