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应用CpG．ODN免疫刺激进行慢性淋巴细胞白J6L病的染色体研究 中文摘要 应用CpG．ODN免疫刺激进行慢性淋巴细胞白血病的 染色体研究 c 研究背景慢性淋巴细胞白血病(chronilymphocyticleukemia， CLL)是一种起源于终末期成熟B淋巴细胞的克隆性恶性血液病。其白血 培养由于主要刺激T细胞分裂，结果大多为正常核型；加用多克隆B细 胞激活剂(polyclonal 色体异常。20世纪90年代以来采用多种探针的组合荧光原位杂交 insitu (fluorescence 出率提高至80％。最近几年德国学者将未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡 CLL的细胞遗传学研究，结果明显提高了异常核型的检出率，特别是检出 了预后差的各种易位。 目的为了证实CpG—ODN刺激法是否能提高我国CLL核型异常检出 率，我们对57例CLL患者进行了临床和实验研究。 方法抽取患者骨髓或外周血，应用CpG—ODN和白细胞介素 美洲商陆(pokeweed 显带技术进行核型分析。应用SAS(statisticalanalysissystem)统计 应用CpG．ODN免疫刺激j矬行慢性淋巴细胞臼血病的染色体研究 中文摘要 Rbl(1 3q14)、ATM(1 等探针对19例核型正常患者的直接法标本进行组合FISH检测。此外， variablechain)基因 抽提患者DNA，使用IgVH(immunoglobulinheavy 重排特异性引物进行扩增，以判断该基因是否发生突变及突变位置。利 用流式细胞仪检测CD38和ZAP70表达。随访患者并对四组核型异常捡出 率以及核型和其它各项检测指标之间的联系进行统计学分析。 结果 (1)四组免疫刺激剂培养CLL细胞的常规细胞遗传学分析 (conventional 细胞，其中8例(15．09％)患者显示核型异常，平均异常细臆百分比为 显示核型异常，平均异常细胞百分比为?。22％；以王L一2作为免疫刺激剂培 以单纯+12或伴有+12的异常为最多，共9例次；染色体结构重排共40种， 其中以易位为最多见，共14例，包括平衡易位1l例(78．5％)和不平衡易位 应用CpG．ODN免疫刺激进行慢性淋巴细胞白咖病的染色体研究 中文摘要 t(14：18)(q32：q21)3例，t(14：1 臂染色体和标记染色体等。染色体部分缺失包括1q一、2p一、3p一、6p一、 例P1jl『M刺激组和1例IL一2刺激组中得到证实，且阳性细胞大多为1个。 示三体一12 种或一种以上FISH异常。 chain reaction)产物经纯化、 235—254bp的单克隆条带。PCR(polymerase 为复杂异常。但统计学检验差别无显著性(／50．05)。 应用CpG．ODN免疫刺激进行慢性淋巴细胞白皿病的染色体研究 中文摘要 常核型。统计学分析未发现CD38、ZAP70表达和核型有联系。 结论①CpG一0DN刺激法是一种简易而有效的刺激CLL中期分裂相产 生的方法，可明显提高异常核型的检出率；②CpG一0DN刺激CLL白血病细 胞能明显提高各种平衡和不平衡易位的检出率；@FISH和常规核型分析 是互相补充的，两者结合能为CLL患者提供更全面的遗传学信息。 关键词：白血病，淋巴细胞，慢性；细胞遗传学；CpG—ODN；FISH； IgVH，突变；CD38；ZAP70；预后 作者：吴亚芳 指导教师：薛永权教授