应用焦磷酸测序术检测短片段牙釉质蛋白基因进行性别鉴定的研究.pdfVIP

Qi’』：l土--。 }flll l I II IIIIfflI IIrlllf ＼1779886 目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………4 英文缩写……………………………………………………………………8 研究论文 焦磷酸测序技术检测短片段牙釉质蛋 白基因进行性别鉴定的研究 前言…………………………………………………………………………9日U舌 …………………………………………………………………………y 第一部分新型短序列性别鉴定方法的建立 材料与方法…………………………………………………………ll 结果…………………………………………………………………18 附图……………………………………………………………………20 讨论………………………………………………………………_…24 第二部分新型短序列性别鉴定方法在法医学中的应用 材料与方法……………………………………………………………29 结果……………………………………………………………………35 附图……………………………………………………………………37 讨论……………………………………………………………………47 结{念……………………………………………………………………49 参考文献……………………………………………………………………50 综述焦磷酸测序技术分析单核苷酸多态性在法医学中的应用 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．!；z4． 致谢……………………………………………………………………64 个人简历………………………………………………………………65 中文摘要 焦磷酸测序技术检测短片段牙釉质蛋白基因 进行性别鉴定的研究 摘 要 目的：性别信息是法医检案过程中及考古研究过程中最重要的信息之 一。通常在尸表保存完整的情况下，法医工作者可以通过形态学分析做出 判定。然而面对重大群体性灾难事件中人的骨架完整性被破坏，或者由于 小孩骨骼发育不全导致形态学分析难以得出鉴定结论时，分子水平的鉴定 方法就显得尤为重要了。目前，常用的进行性别鉴定的DNA技术主要包 因(Amelogenin 广泛，在多个法医个人识别试剂盒中做为性别鉴定的方法，其扩增片段为 106bp和112bp。然而，对于一些高度腐败降解的生物检材，以及由于AMEL 序列突变及性染色体变异造成的“无效扩增”，现有的检测技术往往不能 获得明确的分型结果。针对这一问题，本研究建立了一种新的性别DNA 分析方法，即应用焦磷酸测序技术分析牙釉质蛋白基因45bp的DNA片段， 并对该方法的灵敏度，种属特异性，降解模型，骨骼样本等法医学应用进 行初步研究，以期为一些疑难案件的性别鉴定提供参考。 nucleotide 一条扩增引物标记生物素；利用焦磷酸测序软件建立预期模型；对反应体 系中的引物浓度、M92+浓度、退火温度和循环次数等条件进行优化，选择 最佳反应条件进行PCR扩增，应用焦磷酸测序技术对PCR产物进行测序， 中文摘要 根据测序结果判定性别。应用该方法对100份已知性别(男女各50份) 的中国汉族健康无关个体进行测序分析，验证本方法的可靠性和准确性。 和0．0625ng进行灵敏度检测；应用本方法对猴、狗、兔、猪、牛、鱼、 鸡的DNA样本以及大肠杆菌、肠球菌、念珠菌的菌株进行分析，验证其 种属特异性；将新鲜血液放置于6月．11月的自然环境中26周模拟高度降 I制备人工降解DNA，应用本研究构建的方法及商品 解检材，用DNase Identifil 化AmpF／STR