皂角粉中提取皂角苷.docVIP

从皂角中皂角苷的提取和纯化 2012级生物科学四班林凯2012级生物技术赵永摘 要 皂荚（Gleditsia sinensis Lam.），又名皂荚树、皂角等，属蔷薇目，豆科落叶乔木或小乔木。所结果实为皂荚果，皂荚果皮含有丰富的皂角苷，皂角苷是洗涤剂、乳化剂等洗涤用品的天然材料，皂角苷是非离子型表面活性剂，是一种优良的天然表面活性剂，极易溶于水，洗洁性好，温和无刺激，无害残留物少，对人体伤害几乎为零，目前已经广泛应用于日化、医药等方面。本实验将利用回流提取及系统溶剂萃取法从皂角中提取皂角苷，并利用香草醛—硫酸显色并利用分光光度计测定提取效率。 关键字：皂角苷、提取、纯化 1.前言 皂角苷是非离子表面活性剂、广泛应用于洗涤剂、乳化剂、是应用广泛，性质温和的天然产物之一，有很高的应用价值，工业上有比较成熟的提取方法。本实验小组想了解并运用较为简易的提取天然皂角苷的方法，并将产物纯化，计算本方法的提取的提取效率。 2.实验目的： 1.锻炼生化实验技能 2.熟悉分离提取纯化基本方法 3从皂角中提取皂角苷 4测算皂角中提取皂角苷的提取效率 3.实验原理 3.1皂角苷的提取 本实验应用回流提取法，是应用于大多数有机溶剂沸点较低的特点，通过水域蒸馏，使溶剂气化，冷却后液化回流提取筒，从而不断从皂荚中提取成分，这种方法器材要求简单，操作方便，提取连续性好，安全系数高。 3.2皂角苷的纯化 本实验应用系统溶剂萃取法，皂角苷在含水丁醇或戊醇中溶解度大，且能与水分成两相，可利用此性质从皂角苷水溶液中用丁醇或戊醇提取皂角苷，借与亲水性大的汤、蛋白质等分离，在初步提取后，回收溶剂，将残渣溶于水，滤除不容物，再利用皂角苷不溶于乙醚等强亲脂性的有机溶剂作两相萃取，将油脂、脂溶性色素除去。 4.实验设备 索式提取器（可自行组装圆底烧瓶、冷凝管、胶管、止水夹等）、恒温水浴锅、烧杯、电热炉、玻璃棒、试管、漏斗、滤纸、温度计、电子天平、分光光度计、比色杯 5.实验材料及试剂 5.1实验材料 皂角粉（皂荚研磨制成） 5.2试剂 乙醇、正丁醇、乙醚、77%浓硫酸、香草醛、纯水、皂角苷标准品 6.实验操作步骤 6.1皂角苷提取 用滤纸制作圆柱状滤纸筒,称取10g皂角粉,装入滤纸筒中,将开口端折叠封住,放入提取筒中.将150 ml圆底烧瓶安装于水浴锅上,放入2粒沸石,量取95%乙醇100ml,从提取筒中倒入烧瓶,安装好索氏提取装置,打开电源,加热回流2小时. 实验时能够观察到,随着回流的进行,当提取筒中回流下的乙醇液的液面稍高于索氏提取器的虹吸管顶端时,提取筒中的乙醇液发生虹吸并全部流回到烧瓶内.然后再次回流,虹吸,记录虹吸次数.虹吸5-6次后,当提取筒中提取液颜色变得很浅时,说明被提取物已大部分被提取,停止加热,移去水浴锅,冷却提取液。 6.2皂角苷的纯化 用乙醇提取后，回收溶剂（将乙醇蒸干、在通风厨进行）将残渣溶于水，滤去不溶物，检查分液漏斗是否漏水，确认不漏水后，将水溶液加入分液漏斗中，后加入50ml乙醚，震荡，静置分层，弃去油层，留下液层，在分液漏斗内加入50ml正丁醇，震荡，静置分层，弃去水层，收集正丁醇溶液，蒸干，得到粗皂角苷，重复2-3次以上得到精致皂角苷粉产物。 6.3建立标准曲线 取油茶皂角苷标准品20 mg，用乙醇溶解并移至10 ml容量瓶中，稀释至10 ml，取此液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 ml，分别置于带塞试管中，并加水至溶液体积均为0.5 ml，精密加入8%香草醛溶液0.5 ml，于冰水中冷却加入77%硫酸溶液4 ml，摇匀，混台物于60 ℃加热1 5 min，然后于冰水中冷却10 min，取出置于室温下，以试剂空白为参比溶液，用1 cm 比色皿在波长550nm处测定吸光度，以吸光度与标准溶液质量浓度P(mg／ml)，根据测得数据建立标准曲线。 6.4皂角苷纯度测定 取提取的皂角苷1mg加入置于带塞试管中，并加水至溶液体积均为0.5 ml，精密加入8%香草醛溶液0.5 ml，于冰水中冷却加入77%硫酸溶液4 ml，摇匀，混台物与标准物同时于60 ℃加热1 5 min，然后于冰水中冷却10 min，取出置于室温下。在550nm波长下测定吸光度，根据所得标准曲线方程得出皂角苷纯度。 6.5皂角苷提取效率计算 根据所得数据计算皂角苷的提取效率 7.结果及计算 提取效率= A—根据标准曲线测得浓度 M—提取的得到的皂角苷质量 8.注意事项 8.1提取纯化 1.提取过程中涉及到有机溶剂的浓缩，回收，应在通风橱或通风良好的地方进行提取纯化。 2.实验用量较少且涉及产率计算，实验室用精确度较高的电