荧光标记公用引片段长度差异复合扩增21个snps位点的多态性及法医学应用的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 荧光标记公用引物复合扩增21个SNPs位点 的人类遗传学和法医学应用研究 ．1_‘．—JL- 刖 舌 nucleotide 单核苷酸多态性(single 苷酸位置上存在着两种不同等位基因，其中最少的一种在群体中的频率不少于1 ％。单核苷酸多态性因其占人类基因组中多态性的90％以上而受到广泛关注。其特 点包括以下几点：首先，位点丰富。SNP分布于整个基因组，据估计，基因组中 大约平均每1000bp就会出现1个SNP，从而使其在整个基因组的分布可达300万之 多。其次，突变率低，每代每碱基突变率约为2×10一。尤其是位于编码区的SNP SNP，cSNP)，呈高度稳定性。第三，SNPs位点为单碱基变异，可 (codingregion 分析片段短小，更适合PCR扩增及降解DNA的分析。第四，SNPs适于快速、高通 量检出。其二态变异，易于判型，有利于发展自动化的筛选或检测技术。第五， SNPs多态性在不同人种和／或群体中的分布有所不同，可用于人类遗传学、疾病相 关性及法医学研究。 由于SNPs具有上述特点，不仅很快成为医学、药学、临床诊断学的研究热 点，而且在法庭科学生物物证鉴定领域，尤其在解决降解生物检材个体识别方面 也引起学者们的极大关注。在法庭科学生物物证鉴定领域中，对于保存条件较好， DNA分子比较完整的生物检材，应用现有的DNA分析技术都能较好的解决。但 是，对于保存条件差，DNA分子不完整的降解生物检材尚不能有效解决，这也是 当前面临的难题之一。SNP可分析片段短小，更适合降解DNA的分析，因此通 过积极开展相关研究，有可能建立一种行之有效的适合这类检材分析的新技术手 段。 SNPs位点突变率低，遗传稳定，也是分析人类起源、迁移等比较理想的遗传 JJ等对索马里、土耳其、丹麦、德围、格陵兰、日本、泰国、台湾 标记。Sallchez 和中国大陆9个地区700名无关个体的52个SNPs位点进行分析，通过计算不同 种族和民族间的遗传距离，认为亚洲人群中台湾和大陆人群关系最近，其次是二 者与泰国人群的关系，再次为与日本人群的关系；研究表明所调查的亚洲人群与 其它人群的关系较远，从近到远依次为格陵兰、德国、丹麦、土耳其，最远的为 索马里。柯越海等通过对中国各地9988例男性随机样本Y染色体M89，M130和 YAP 3个单倍型分析，认为Y染色体的证据支持现代中国人起源非洲假说。刘炬 等对我国贵州地区布依族、仡佬族、仫佬族、毛南族、壮族5个少数民族10个 SNPs构成的Y染色体单倍型分析，认为这5个民族之间遗传关系密切，与国内其 他民族有较大的遗传差异，是相对独立的群体。 虽然目前分析SNP的方法有多种，但普遍存在两个方面问题。一是，一些无 需专用SNP分析设备的方法，如RFLP、SSCP方法，或者是检测通量低，一次只能 检测出单个SNP位点，获得的信息量少，或者是实验操作繁琐，检测过程费时， 如SNaPshot，均不适合法庭科学领域的高通量检测需求；二是，另一些操作简单 检测通量高的方法均需要借助昂贵的SNP分析专项设备和配套试剂实现，不利于 MALDI—TOF 方法本身的推广，例如DHPLC、基因芯片法、 MS等方法。 为解决法庭科学生物物证鉴定领域降解生物检材的鉴定问题，了解多位点 SNPs在中国不同民族人类遗传学、法医学意义并解决现有SNP分析技术的瓶颈问 题，本研究结合当前法庭科学实验室普遍采用荧光标记和毛细管电泳分离技术的 实际情况，开展了具有普遍适用性的基于毛细管电泳分离技术的荧光标记多位点 SNP分型技术研究，旨在建立一种高效率、低成本、快速准确的多位点SNP分型技 术。并通过调查常染色体更多SNPs位点在中国不同民族中基因频率调查，以了解 SNPs在中国不同民族中的分布状态，在此基础上进一步分析不同民族间的遗传关 系，并根据调查结果评估复合扩增21个SNPs在法庭科学中的应用价值。 材料与方法 一、实验材料 1、中国汉、蒙、壮三个民族的血痕样本 辽宁地区汉族健康无关个体血痕样品203份；内蒙古自治