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实验六 水中双酚A的固相萃取－液相色谱法测定 双酚A（BPA）是生产聚碳酸酯和环氧树脂的重要原料。由BPA制造的最终产品包括聚碳酸酯塑料制品、附着剂、保护涂层、汽车透镜、建筑材料、光学透镜、热纸、纸涂层以及电子器件的包覆材料等。由于BPA在食品包装材料上的广泛使用，它的安全性问题受到极大关注，有报道指出BPA可以在受热情况下从塑料中溶出，而且存在于食品中，并且BPA具有雌激素活性。目前大量的研究表明内分泌干扰物在动物生殖和发育、神经、免疫、致癌和生态等方面存在潜在危害效应。 一、实验原理 在分析化学中，样品预处理的好坏是影响分析灵敏度、准确度和分析速度的重要因素。目前，最常用的样本富集方法仍是液-液萃取(LLE)。为了提高富集的效率，在过去的二十多年中，固相萃取作为化学分离和纯化的一个强有力工具出现了。从痕量样品的前处理到工业规模的化学分离，固相萃取在制药、精细化工、生物医学、食品分析、有机合成、环境和其他领域起着越来越重要的作用。 固相萃取(Solid Phase Extraction, SPE)是一种试样处理技术，由液固萃取和柱液相色谱技术相结合发展而来。与LLE相比，SPE具有如下优点：(1)速度较快，缩短了预处理时间；(2)较高的精密度和准确度；(3)分析物的高回收率；(4)有机溶剂的低消耗，降低了实验成本，又减少了对环境的污染；(5)不出现乳化现象，易获得较为纯净样品；(6)操作简单，易于自动化。正因为这些优势，SPE日趋受到重视，现已用于GC、LC、MS、NMR、UV－Vis、AA等的样品预处理。 固相萃取是一个包括液相和固相的物理萃取过程。在固相萃取中，固相对分离物的吸附力比溶解分离物的溶剂更大。当样品溶液通过吸附剂床时，分离物浓缩在其表面，其他样品成分通过吸附剂床；通过只吸附分离物而不吸附其他样品成分的吸附剂，可以得到高纯度和浓缩的分离物。 保留和洗脱 在固相萃取中最通常的方法是将固体吸附剂装在一个针筒状柱子里，使样品溶液通过吸附剂床，样品中的化合物或通过吸附剂或保留在吸附剂上（依靠吸附剂对溶剂的相对吸附）。“保留”是一种存在于吸附剂和分离物分子间吸引的现象，造成当样品溶液通过吸附剂床时，分离物在吸附剂上不移动。保留是三个因素的作用：分离物、溶剂和吸附剂。所以，一个给定的分离物的保留行为在不同溶剂和吸附剂存在下是变化的。“洗脱”是一种保留在吸附剂上的分离物从吸附剂上去除的过程，这通过加入一种对分离物的吸引比吸附剂更强的溶剂来完成。 容量和选择性 吸附剂的容量是在最优条件下，单位吸附剂的量能够保留一个强保留分离物的总量。不同键合硅胶吸附剂的容量变化范围很大。选择性是吸附剂区别分离物和其他样品基质化合物的能力，也就是说，保留分离物去除其他样品化合物。一个高选择性吸附剂是从样品基质中仅保留分离物的吸附剂。吸附剂选择性是三个参数的作用：分离物的化学结构、吸附剂的性质和样品基质的组成。 固相萃取的类型包括键合硅胶SPE、聚合物吸附剂SPE、免疫亲和吸附剂SPE和分子嵌入聚合物SPE。可应用SPE的填料种类繁多，比较常用的是，吸附型的有：活性炭、硅藻土、硅酸镁、氧化铝等。化学键合型硅胶，其中正相的有：氨基、腈基、二醇基等；反相的有：Ｃ1、Ｃ2、Ｃ6、Ｃ8、Ｃ18、腈基、环己基、苯基等；离子交换型的有：季胺基、氨基、二氨基、苯磺酸基、羧基等。固相萃取剂除要求对流动相和被富集的化合物呈化学惰性外，还应保持吸附可逆性的同时具有很高的吸附能力，吸附平衡要快。选择固定相基本上是遵循相似相溶原则的。分析物的极性与固定相极性相近时，可以得到分析物的最佳保留，两者极性越相近，保留越好，所以要尽可能选择相似的固定相。 二、实验设备与试剂 1．试剂 BPA 2.0×10-4mol/L储备液。试剂甲醇及乙腈（均为HPLC级），LC18 6CC 0.5G固相萃取管，水为纯净水。模拟水样含BPA 4.0×10-7mol/L。 2．仪器 高压液相色谱仪（Kromasil C-18柱），色谱工作站， UV-Vis分光光度计，固相萃取装置（Supelco，USA）。 图1 SPE小柱示意图 三、实验步骤 1．柱预处理 使用2ｍＬ甲醇润湿小柱，活化填料，以使固相表面易于和被分析物发生分子间相互作用。同时，可以除去填料中可能存在的杂质。再用2mL水或者同样品基质近似的水溶液（pH、盐浓度和溶剂浓度等）冲洗小柱，去处过多的甲醇，以便样本与固相表面发生作用。填料未经预处理或未被溶剂润湿，会引起溶质过早穿透，影响回收率。 2．萃取 将模拟水样0.50L装入容量瓶，连接至大容量采样管，将出水口至于废液回收容器。连接好管路，打开真空泵电源，使得水样吸入SPE柱，控制腔体的真空度，保持流速不超过5mL/min。 3．洗脱 用量筒量取约9