富集纯化母血中儿有核红细胞并利用胎儿有核红细胞进行胎儿非整倍体的无创性产前诊断.pdf

华中事}控大学同济医学院 博：{=研究生论文 富集纯化母血中胎儿有核红细胞并利用胎 儿有核红细胞进行胎儿非整倍体的无创性 产前诊断 华中科技大学鞠济医学院附属翻济医院妇产料 博士研究生徐晓燕 指导老师 陈汉乎教授 中文摘要 第一部分从母亲钋周血中富集胎，L有核红纲胞 目的利用显微操作术和流式细胞术分离密集母血中的胎儿有核红细胞 (FNRBCs)，逶过对褰集方法熬魄铰，探讨分选麓jL缡戆豹激逶方法。 方法收集120例孕周为10．32周的孕妇外周衄，密度梯度离心分离出单个核细 胞层，分为2等分，分别用显微擞作和三种抗体流式分选富集胎儿有核红细胞 (FNRBCs)，螽者每鲷标本分为5缀，分爨烟入l；同抗体：篱1缮．撬转锾蛋 的SRY基因，计算饕定细胞的符合率。 ；l；80．S3％，签定缨鹣符合率61．7％：蠹缀昧黯l，鹃雕陡缀j鹣浚出率帮鉴定蹋糙 竹含半分别为：2．8％，70．8％；5．74％，655％：(}．25％95．8％：0．74％，95．8％； 华中辩技大学同济篷学院 博士研究生论文 个，纲藏鉴定簿合搴82．5％。 结论：流式细胞术结合显微操作法可得到到商纯度的FNRBCs，为后续的产 前诊断打下良好的基础。 关键遴：FNRBCs：嚣徽操作术；滚式缀瑰零；无剑瞧产§i诊綮 DNA 第二部分签定胎，L缨藤及母盘中游离胎歹L 基鳇逶避震不同方法鉴定照，I缨藏及骆，L游囊DNA，昆较各秘方法夔佬浚点， 探讨这几种方法的适用性。 结合显微揉终术提取攀令验，L细戆，要於0。5ml全瞧提取游离DNA。垮每爨标 技术检测单个FNRBC中的Y染色体；3组利用荧光定量PCR扩增母血中游离 骀，LDNA中戆SRY蒸因。 1例，阳性准确率98．9％(89／90)。 结论PRINS和QF．PCR是准确性离，特意性强的方法，可用于胎儿细胞及胎儿 游离转辩A豹鉴定。 Ⅲ 关键词：PEP．PCR 胎儿游离DNA．PRINS，实时荧光定量PCR 磐 第三部分利用孕妇外周血进行无创性产前诊断胎儿非整倍体 实验一通过检测孕妇乡}周盎渍中的AFP，ft-HCG秘赫E3含量 进行胎儿先天愚型的筛套 华中科技夫学嗣济医学院 溥士研究生论文 霆静探讨采蔫率麓蘩自(AFP)，绒罨黢往注豫激索S亚单位(Free B-HCG)，游离 雌三醇(¨E3)血清三联法在染色体界常为主的先天性缺陷的产前筛查作用。 方法对2003年8月爱2005年8月来我院妇产科门诊进行产前检查的孕妇278 嘲，在箱情情况下，鸯戆选择詹氏巍漆标记筛查。采蠲酶联免疫法测定上述3颈指 标，并结合孕妇临床资料，用唐氏筛焱风险软件进行分析。最后随访追踪每例筛选 的孕妇至胎JL出生。 结采278铡孕妇中，赢危人群25铡，占总数的8．9％。异常胎，L2铡，其中2l三 体1例，死胎1例。并发现唐氏征商风险的孕妇伴有妊娠并发瘢lO例。 结论 对黪，L先天性缺陷，特别是染色体异常的脸儿产前筛态是重要的手段之 一。产魏筛查可降低豳产，L死亡率，降低出生缺隧率。它其菊漾要的社会效应和 实用性，可普遍推广馒用。 关键词：产翦筛查：艨氏综合征；甲黔蛋色：绒毛膜促性腺激豢；未结合雌三醇 实骏二裂熙攀妇盘中的黪Jk有核缝缨施诊甄胎歹毛遵≥整绪体 目的探索用孕妇外周J艇中的胎儿细胞进行无创瞧诊断胎JL非整倍体的新方法。 方法敬实验一中痦瓣查高蓬孕妇翻到本实验室囊愿要求梭囊的孕12．32周孕 妇的肘前静脉血，共112例。密度梯度离心后取雅个核细胞屡，采用流式细胞术 分蠲捡#l《FNRBC