大鼠脑缺血再灌损伤后hif-1α对胶质亚型细胞修复重塑的调控机制.pdf

L 中文摘要 英文摘要 研究论文 前言 材料 结果 附图 附表 讨论 参考 综述…… 致谢…… 个人简历 中文摘要 大鼠脑缺血再灌注损伤后…F-1Q对胶质亚型细胞修复重塑的 调控机制 摘 要 目的： Q质粒。将HIF．1 本实验采用体外重组技术，制备pcDNA3．1．HIF．1 a质粒经颈部颈外．颈内动脉途径注射入大脑中动脉缺血再灌注损伤的大 亚型细胞行特异性免疫组织化学染色，观察各组亚型细胞的变化。分别将 HIF．1 Q、VEGF同胶质亚型细胞行荧光双染色，于激光共聚焦显微镜下 观察共表达的情况。综合上述实验结果评价重组HIF．1Q质粒对于脑梗死 的治疗效果，及其对多种细胞修复重塑的调控机制。 方法： 1 经体外获得的HIF．1 a的cDNA，测序检测后克克隆入真核表达载体 pcDNA3．1，酶切鉴定重组子 2 大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型制作参照Zea Longa等报道的方法 并加以改进。10％水合氯醛腹腔麻醉，颈部正中切开，分离肌肉组织暴露 颈部血管，经颈外动脉向颈内动脉插入线栓，线栓头端距血管分叉处 1．8cm左右视为线栓梗死大脑中动脉。2h后取出线栓注入HIF．1Q质粒， 留取6h、12h、24h、72h和7d观察，对照组注入PBS； 3 将相应时间点实验组与对照组大鼠处死后断头取脑，视交叉后做 la 2mm厚连续切片，第一片做TTC染色，其余做石蜡包埋，5m厚连续 石蜡切片，行HE染色并对各胶质亚型细胞行特异的免疫组织化学染色， 高倍镜下分别计数不同时间点实验组和对照组各胶质亚型细胞的个数； 4 将石蜡切片分别对HIF．1a、VEGF同各胶质亚型细胞做免疫荧光双 染色，于激光共聚焦显微镜下观察阳性细胞的重叠情况，分析胶质亚型细 胞是否存在与HIF．1Q、VEGF的表达； 5 1 统计学分析：使用SPSS5．0统计软件对实验数据进行统计学分析。 组间计量资料比较采用t检验，以P0．05表示差异有统计学意义； 结果： 中文摘要 1 C1 RT-PCR扩增HIF．1 Q质粒； 构建并酶切鉴定后获得pcDNA3．1．HIF．1 2 大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注损伤后，经颈外动脉注射HIF．1Q质粒 死面积明显小于对照组，而且存活7d大鼠神经功能缺失评分明显低于 PBS对照组； 3 HIF．1 Q对大鼠脑缺血再灌注后胶质亚型细胞的影响：大鼠脑缺血再 灌注6h、12h、24h、72h和7d，经颈外动脉注射HIF．1Q质粒组的星形胶 二者相同时间点阳性细胞均数做t检验比较，缺血再灌注损伤24h及以后 各时间点，HIF．1 注射HIF．1 1．60±2．408，PBS ±2．074、14．40±4．393、20．80±2．28