大鼠脐带间质干胞的培养与鉴定.pdfVIP

广州医学院硕士论文 大鼠脐带间质干细胞的培养与鉴定 中文摘要 目的 探讨早产SD 大鼠脐带沃顿胶质组织分离大鼠脐带间质干细胞的可能性，研 究其生物学特征及体外诱导分化潜能，为下一步进行同种异体移植进行细胞生物 疗法奠定基础。 方法 通过将SD 大鼠按雄：雌=1 ：2 人工合笼获得孕19 天大鼠，在无菌环境下通 过剖宫产获得新生大鼠，机械分离大鼠脐带组织剔除血管组织获得沃顿胶质组 织，采用组织块直接贴壁法在含10%FBS 的DMEM/F12 培养基中培养脐带组织 获得大鼠脐带沃顿胶质细胞，并进行传代、冻存和复苏；对培养所得大鼠脐带沃 顿胶质细胞采用直接计数法进行生长曲线绘制；通过细胞免疫组化检测大鼠脐带 间质干细胞(rUCMSCs) 中Brdu 阳性表达；取3 代rUCMSCs 分别添加成脂诱导培 养基和成骨诱导培养基进行诱导分化潜能鉴定；取3 代rUCMSCs 采用流式细胞 仪进行细胞周期、细胞表面标记鉴定。 结果 大鼠脐带沃顿胶质组织可在体外培养出梭形成纤维样贴壁生长细胞；大鼠脐 带沃顿胶质细胞可在体外快速增殖；Brdu 可在48 小时内高效掺入大鼠脐带沃顿 胶质细胞呈阳性表达；大鼠脐带沃顿胶质细胞可在体外诱导体系中向成脂、成骨 分化；大鼠脐带沃顿胶质细胞 92.14%处于 G -G 期，阳性表达间质干细胞表面 0 1 抗原CD29、CD44 和CD90，而不表达造血干细胞标记CD34 和CD45 。 结论 SD 大鼠脐带沃顿组织中可培养出大鼠脐带沃顿胶质细胞，该细胞在形态学、 1 广州医学院硕士论文 大鼠脐带间质干细胞的培养与鉴定 生长增殖特点、诱导分化潜能和细胞表面抗原表达方面具有间质干细胞的形态特 征，符合脐带间质干细胞的鉴定标准，是一类多能干细胞，有望用于细胞生物治 疗、组织工程等研究。 关键词：脐带 沃顿胶质 间质干细胞 成脂诱导 成骨诱导 2 广州医学院硕士论文 大鼠脐带间质干细胞的培养与鉴定 Abstract Objective Mesenchymal stem cells isolated from Wharton’s jelly of rat umbilical cord,which were cultured and identified in vitro,are proposing to be an alternative source of allotransplantation cell therapy research. Materials and method Rat umbilical cord mesenchymal stem (rUCMS) cells were harvested from E19 pregnant rats operated by cesarean section , which were isolated from Wharton ’s jelly of rat umbilical cord and vessels were removed by mechanical dispelled. rUCMS cells were maintained in DMEM/F12 medium supplemented with 10 % fetal bovine serum(FBS), 100 units/ml pecicillin, and 100ug/ml streptomycin, followed with passaged,