应用微卫星dn标记研究普氏原羚遗传多样性.pdfVIP

中文摘要 普氏原羚(PrDc印Mp陀ew日b胁f)是中国特有的濒危物种，开展该物种的保护 遗传学研究是实施普氏原羚拯救工程的基础工作。本文应用微卫星标记来研究普 氏原羚遗传多样性，主要研究内容如下： 一、不同普氏原羚粪便保存方法比较：通过将普氏原羚的粪便在野外分别采 取60℃干燥后低温保存，75％乙醇保存，100％乙醇保存，直接低温(保温箱中 加生物冰袋)保存。结果表明，短期内都均可得到高质量的DNA，而用100％乙醇 保存粪便DNA的时间更为长久。同时，建立了一种从粪便中有效提取DNA的方法。 该方法具有高灵敏度、操作简单、非损伤等特点，解决了珍稀濒危物种难于取样， 无法进行大规模研究的难题。探讨了一种既能使野外采集的粪便样品DNA保存完 好，又方便带回实验室用于分子水平研究的粪便保存方法。 二、普氏原羚哈尔盖亚种群遗传多样性分析：利用牛、羊的40对微卫星引 物在哈尔盖地区43个粪便样品中扩增，筛选出12对具有高度多态性的微卫星引 物对哈尔盖种群遗传多样性进行研究。12对微卫星引物在43只普氏原羚基因组 DNA中共检测到94个等位基因，平均有效等位基因数介于9．3858～4．3867。说 明微卫星两侧序列具有高度保守性，而核心序列具有高度多态性，是适合于在物 种间相互扩增的。筛选到的12对微卫星位点在普氏原羚DNA基因组中的多态信 息含量值介于O．884l～O．8026之问，说明检测的位点均为高度多态性。12对微 卫星位点的平均观察基因杂合度为O．8483，从核基因角度揭示该研究种群具有 丰富的遗传多样性。 三、普氏原羚主要亚种群遗传多样性分析：最后以采集于青海湖的天峻、鸟 岛、哈尔盖、青海湖火车站、元者和湖东的6个普氏原羚亚群体为研究对象，进 行了12对微卫星位点的遗传参数分析。结果表明：天峻、鸟岛相对与其他种群 分化时间较长，遗传距离最小为哈尔盖种群和元者种群。在聚类分析中，元者种 群与湖东种群以很小的遗传距离首先被聚为一类，然后是青海湖火车站种群与哈 尔盖种群被聚为一类，天峻种群和鸟岛种群自成一类。普氏原羚总遗传变异的 4．98％来源于种群之间的遗传变异，95．02％属于种群内的遗传变异。普氏原羚种 群的Nm=4．77361，说明有较高的基因流。种群两两之间湖东和元者种群问有 丰富的基因流，天峻和鸟岛之间的基因流最少。 关键词：普氏原羚：微卫星；粪便保存；遗传多样性 ABSTRACT aIl species int11eC11ina． The尸阳c叩mp圮Pw日瓜托isendaIlgereddis廿ibutingonly Theconservationofthe researchisthebasisforthe species’genetic implementation of work．This micosatellite projectsP，‘D“妒棚p船P¨a“航frescueessayexploresusing DNAsto the its contemsareasf0110ws： geneticdiversity，a11dmajor study feces The dif如rentmemodsof methodsare comrast锄ong preservation：The thatfeceswas storedinthefield collectionatalow respectively during temperature after at in in100％ethanolarId drying60℃，stored75％