环氧合酶-2抑剂ns-398在子宫内膜癌治疗中作用机制研究.pdfVIP

摘要 目的：探讨环氧合酶一2与子宫内膜癌发病的关系，比较人子宫内膜癌细胞 系RL95-2在选择性环氧合酶一2抑制剂处理前后蛋白质表达谱的变化，从而更深 入地了解应用环氧合酶一2抑制剂预防和治疗子宫内膜癌的作用机理。 方法：1)联合应用组织芯片和免疫组化技术检测不同分化程度子宫内膜癌 组织中环氧合酶一2和芳香化酶蛋白的表达；2)MTT法检测不同浓度选择性环氧 合酶一2抑制剂NS一398单用或与顺铂联用对子宫内膜癌RL95—2细胞生长的抑制 率，流式细胞技术检测NS一398作用后细胞周期变化与凋亡率；3)RT—PCR检测 NS一398作用后子宫内膜癌RL95-2细胞血管内皮细胞生长因子基因表达水平的变 化。4)利用固相梯度双向凝胶电泳技术建立药物处理前后细胞总蛋白双向凝胶 电泳图谱，经PDOuest软件分析，选取差异表达的蛋白质点进行基质辅助激光解 吸电离飞行时间质谱分析，获得肽质量指纹图谱，Mascot软件搜索MSDB数据库 鉴定蛋白质。 结果：1)子宫内膜癌腺上皮环氧合酶一2表达阳性率为67．24％(39／58)，而 芳香化酶的表达阳性率为65．52％(38／58)。在环氧合酶一2腺上皮细胞表达阳性 的子宫内膜癌组织中芳香化酶表达阳性率为82．05％(32／39)，而环氧合酶一2表达 阴性的子宫内膜癌组织中芳香化酶表达阳性率为31．57％(6／19)，二者差异有显 赖(PO．05)。3)联合使用浓度为100umol／1及t50umol／1NS一398与lmg／ml 顺铂对子宫内膜癌RL95—2细胞生长的抑制优于二者单用。流式细胞检测显示 NS一398处理后细胞周期停滞于G1期，细胞凋亡率无明显变化；4)NS一398处理后 子宫内膜癌RL95-2细胞血管内皮细胞生长因子表达下调；5)经双向凝胶电泳和 图像分析，筛选出18个差异表达蛋白点，其中14个在药物处理后表达下调，4 个表达上调。经质谱鉴定的蛋白包括5个NS一398处理后表达下调的蛋白：即原 肌球蛋白、热休克蛋白70、烯醇酶、异源核糖核蛋白K和蛋白二硫键异构酶和1 个表达上调蛋白：即磷脂酰乙醇胺结合蛋白。 结论：环氧合酶一2表达上调与子宫内膜癌的发生有密切关系。选择性环氧 合酶一2抑制剂能有效抑制子宫内膜癌细胞生长，并可增加肿瘤细胞对顺铂的敏 感性。环氧合酶一2抑制剂通过干预细胞骨架、凋亡等多条途径发挥作用。这为 进一步了解COX一2抑制剂的作用机制，并为子宫内膜癌的预防和治疗提供了理 论和实验依据。 关键词 子宫内膜癌，环氧合酶一2，化学治疗，蛋白质组学 ABSTRACT the between and objective：Toanalysisrelationship cyclooxygenase一2 endometrial associatedwith the effects cancer,determiningproteins growthinhibitory ofselective NS一398in endmometrial cyclooxygexmse一2(cox一2、inhibitor adenocarcinacell． Methods：1)Tissueand werecarriedoutto microarrayimmunohistochemistry the ofCOX一2andaromataseinendometrialcancer analysisexpression protein tissue； Wasusedtodeterminthe concentrationofNS-398in 2)MTTassay Inhibitory RL95-2cell．The