紫杉醇和吡柔比治疗骨肉瘤的分子机制的研究.pdfVIP

中文摘要 紫杉醇和吡柔比星治疗骨肉瘤的分子机制的研究 摘 要 目的：骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤，好发于 1020岁的青少年，恶性程度高，预后差【11，手术和化疗在临 床治疗骨肉瘤提高患者生存期中发挥着重要和关键的作用 12]。但是，在骨肉瘤复发患者的化疗中发现存在高的失败率 和较低的中位生存率【3】。研究骨肉瘤化疗机制对骨肉瘤的治 疗和提高病人的生存率是非常必要的。吡柔比星已临床用于 治疗骨肉瘤，而紫杉醇只作为治疗骨肉瘤的二线用药而且应 用不如吡柔比星【41。目前已有吡柔比星和紫杉醇在临床上联 合应用的报道【5—71。然而，很少有对化疗药物诱导骨肉瘤细 胞凋亡的分子机制的研究。因此，为了找到更加合理和-彳了效 的综合治疗方箸：，本实验研究了吡柔比星和紫杉醇诱导凋1℃ 活性的分子机制。 10％DMEM培养基中常规培养，待细胞进入对数生长期后月j 于实验。 l光镜观察：将不同浓度的紫杉醇和吡柔比星作用于 MG．63细胞，在倒置相差显微镜下定时观察细胞的生长情况 并照相。 2 培养于96孔培养板中，进入对数生长期后采用四甲基偶氮 中文摘要 作用。 3流式细胞仪检测细胞周期：采用不同浓度的紫杉醇和吡 度为5×106个，用PBS洗一次，离心去上清；加入冰预冷 TrintonX．1001．O％)室温避光 (PropidiumIodide，PI：50mg／L II型流式细胞仪检测细胞凋亡和细 染色30min，用Epics．XL 胞周期分布，应用软件进行分析。 4Western印迹法观察紫杉醇及吡柔比星作用后的人成骨 的表达。 杉醇处理MG一63细胞12h后，细胞折光变强，部分细胞体 积变小变圆，24h后细胞开始皱缩，贴壁能力差，细胞体{{：；{ 更小，少量细胞漂浮，48h后细胞体积普遍变小，胞质浓缩， 大量细胞变圆漂浮，72h后大部分细胞变圆，失去增殖能力 漂浮于液体中，出现明显的药物抑制现象。103nmol／L吡柔 比星作用12h后细胞增值数量减少，细胞体积增大胞膜破裂 胞质外溢，细胞坏死漂浮，24h后分裂期细胞少见，胞膜破 裂细胞坏死，漂浮细胞增多，48h后大部分细胞形态不规则， 体积增大，坏死漂浮，存活细胞颜色晦暗，生长停滞，72h 中文摘要 显示紫杉醇和吡柔比星均能明显抑制MG．63细胞增殖，并 后，G0／G1期前面出现凋亡峰，G2／M期所占比例随药物浓 度和时间增加呈上升趋势，而G，期所占比例呈递减趋势。 48h、72h后未见明显凋亡峰出现，S期所占比例随药物浓度 紫杉醇和吡柔比星处理过的骨肉瘤细胞与对照组相比均表 蛋白表达增强。 结论：(1)紫杉醇和吡柔比星均对骨肉瘤细胞MG．63 存在抑制细胞增殖作用且具有时间．剂量依赖关系。 随时间 延长不同浓度吡柔比星对细胞的最终抑制作用是一致的。凋 亡峰最高时的浓度可能是最适浓度。低浓度紫杉醇长时间和 高浓度紫杉醇短时间对细胞抑制作用～致。浓度和时间不是 很重要的选择，凋亡峰最高的时间和浓度效果最佳。 用，并且有一定的时间．剂量依赖性，使细胞周期受到阻滞， 并进一步诱导其凋亡。吡柔比星在细胞增殖周期中阻断细胞 进入G2期，使细胞停滞于S期，抑制DNA合成干扰细胞 分裂。在一定范围内存在时间．剂量依赖性且对剂量关系更密 中文摘要 切。不同浓度紫杉醇作用骨肉瘤细胞后G0／G1期比例整体呈 下降趋势，表明紫杉醇对细胞增殖周期的G0／G1期存在阻断 作用，具体机制有待进一步研究。不同浓度吡柔比星作用骨 肉瘤细胞后细胞G0／G1比例呈先下降后上升趋势，表明吡柔 比星对骨肉瘤细胞增殖周期GO／G1期延缓作用。 (3)如果S期过大时停药可导致肿瘤细胞继续分裂， 且分裂很快，如果是G2／M期，停药后细胞很快进入S期。 细胞被阻滞于GO期是最有效的。浓度过低时未见明显凋亡 峰说明药物只杀伤正常细胞达不到杀伤肿瘤细胞的目的。浓 度过高时仍无明显凋亡峰出现，表明浓度过高时凋亡较少且 相对副作用较大。只有合适有效浓度时，即凋亡峰明显时达 到杀伤肿瘤细胞的目的。吡柔比星还可能通