脂质过氧化损伤内皮细胞对血管平滑肌细胞凋亡的影响及维生素e的作用.pdfVIP

文 搬 中f 日 的 ＼ ROSS的损伤应答学说认为，各种危险因子首先以某种方式 导致内皮细胞(Ec)的机能失调，从而发生血液或血管壁细胞间的 一系列相互作用和调控，进而导致动脉粥样硬化(AS)病变的发 生。我们的研究已表明，内皮细胞对脂质过氧化是敏感的，脂质过 氧化损伤内皮细胞后，动脉内可出现AS的纤维斑块病变。而在 AS纤维斑块病变的形成中血管平滑肌细胞的增殖具有重要意 义。最近的研究发现，细胞凋亡在AS动脉病变发生过程中也可能 嗅有重要作用。细胞凋亡可见于AS各个阶段，早期斑块内仅少数 细胞经历凋亡，进展期斑块内凋亡细胞数明显增加，主要是大量的 血管平滑肌细胞，巨噬细胞发生凋亡。血管平滑肌细胞凋亡尤其 在AS斑块稳定中具有重要的意义，大量的血管平滑肌细胞凋亡 能够引发斑块破裂，继发血栓形成及心梗发生。 方 法 为迸一步研究脂质过氧化损伤的内皮细胞在AS发生、发展 中的作用，我们用培养的人脐带静脉内皮细胞和人脐带动脉平滑 服细胞进行实验。以不同浓度的脂质过氧化反应的诱发剂——氢 过氧化枯烯作用于内皮细胞，用八木国夫TBA法检测脂质过氧 化反应的代谢终产物丙二醛(MDA)的含量，并铜备内皮细胞条件 培养液(ECCM)。将内皮细胞条件培养液作为实验因素作用予培 养达融合状态的平滑肌细胞。用相差显微镜、透射电子显微镜等形 态学方法观察平滑肌细胞的凋亡。并用琼脂糖凝胶电泳检测凋亡 -1。 的平滑肌细胞DNA的片段。最后采用免疫组织化学方法检测凋 亡相关蛋白p53、bcl一2的变化，进一步探讨内皮细胞条件培养液 诱发血管平滑肌细胞凋亡的发生机制。 结 果 内皮细胞培养液中脂质过氧化物(LPO)的含量的测定结果 表明，氢过氧化枯烯能够激发内皮细胞脂质过氧化反应，该反应能 被维生素E抑制。相差显微镜下可见，培养达融合状态的血管平 滑肌细胞的胞体细长，呈长的梭形，多层生长，具有典型的“峰”， “谷”现象。经氢过氧化枯烯浓度为0．5mmol／L的内皮细胞条件 培养液作用后，血管平滑肌细胞与对照组相比，发生不同程度的收 缩，细胞连接疏松，细胞问间隙扩大，细胞体积变小，胞浆皱缩呈多 角形，或星芒状，个别胞核深染、模糊不清。而在氢过氧化枯烯浓度 为1．Ommol／L的实验组，血管平滑肌细胞明显收缩，大多数细胞 胞浆皱缩，细胞间连接疏松，甚至细胞变圆附于其它细胞上，在 “谷”的位置血管平滑肌细胞稀疏，部分脱落；而“峰”处细胞较多， 收缩呈簇。在氢过氧化枯烯浓度为0．1mmol／L及0．5mmol／L加 维生素E组上述改变轻微。透射电镜观察，对照组血管平滑肌细 胞呈长的梭形，可见血管平滑肌细胞的肌丝，致密斑及基底膜等结 构。经氢过氧化枯烯浓度为0．5retool／L的EC—CM作用后血管 平滑肌细胞收缩变小，胞浆浓缩，形态不规整，但细脆膜完整，胞浆 内有大量粗面内质网和线粒体聚积，大部分线粒体肿胀、扩张星空 泡状，嵴结构模糊不清或消失。细胞核形态不规则，染色质聚积呈 团块状，有的呈半月状聚积予核膜下，核仁消失。氢过氧化枯烯浓 度为1．Ommol／L时，胞浆内有更多的粗面内质网和线粒体蒙积、 肿胀、扩张发生空泡变。可见核碎裂，染色质散在胞浆内，细胞膜完 整。见较多有完整的细胞膜包裹以“出芽”的方式由胞体脱落的结 ·2- body)，内含肿胀，扩张细胞器结构，细胞 犄酃凋亡小体(apoptotic 器膜完整，含或不含碎裂的染色质团块。氢过氧化枯烯浓度为0． 轻微。琼脂糖凝胶电泳结果表明：氢过氧化枯烯浓度为1．Ommol／ L的EC—CM作用后，培养的血管平滑肌细胞有DNA梯谱出现， 梯谱出现。上述结果表明，脂质过氧化损伤的内皮细胞可引起血管 平滑肌细胞的凋亡。免疫组织化学结果显示，随氢过氧化枯烯浓度 的升高，内皮细胞的条件培养液作用的血管平滑肌细胞的p53蛋 自表达增强，bcl一2蛋白表达下调。