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液相色谱概述 流动相为液体的色谱方法 第一节 概 述 以液体为流动相的色谱法称为液相色谱法，根据固定相 形式不同，可分为纸色谱、薄层色谱（平板色谱）和柱色谱，柱液相色谱 根据分离原理又可分为： 吸附色谱 分配色谱 离子色谱 排阻色谱等 目前，液相色谱主要指柱液相色谱。 一、发展简况 几十年来，色谱学科不论在色谱工作者人数、发表著作的数量、所分离样品的种类和复杂性，以及分离速度等方面都有很大的发展，而且这期间有几次飞跃： 第一次，四十年代 分配色谱 纸色谱；High Performance Liquid Chromatography--HPLC 第二次，六十年代早期 凝胶、排阻色谱。预计还会有更大发展，现代液相色谱技术使柱色谱不论在分离效率、分析速度还是在操作自动化方面都发展到一个崭新阶段。 二、HPLC的特点 1、可分离分析高极性、高分子量和离子型的各种物质。 2、柱效很高，每米可达3万块以上，一般用20 -- 25cm的柱子，由于固定相的不断改进，最短的只有3cm，板数可达 3000--4000，能满足一般分析的需要，有很高的分析速度。 3、柱子短，对压力要求低。过去高压，现在高精度、高稳定性。 4、一般在室温下操作，样品不需预处理，操作方便，容 易掌握。 5、流动相的作用比气谱中大，流动相的选择成为一个主要问题。 6、HPLC不仅用于分析目的，还可用于制备纯样品。 7、柱子昂贵，消耗大量溶剂，仪器价高，缺高灵敏度、通用的检测器。 第二节 液谱过程的理论 一、溶质在色谱过程中的保留值 在液相色谱中 溶质-------组分 溶剂--------流动相 流体通过填充柱时，它在柱内的线速度与压力梯度成正比，与流动相本身的粘度成反比。 由于压力梯度与流速方向相反，负号表示方向，B0为比 例系数，又称为比渗透系数。仅与dP和填充情况有关，它的 表达式： 其中：ε是填充柱的孔隙度，一般0.4左右，代入 对于多孔硅胶柱 在液谱中，压力梯度是个常数 或 由于液体压缩性很小，u与平均线速u几乎相等，这样 而保留时间: k’是决定组分保留的关键数值，在液谱中测k’值，不象GC中那么容易，因为要找一种完全不被保留的组分是非常困难的，现在常用的方法是： 在吸附色谱中，使用比流动相极性更弱的溶剂作为样品； 在分配色谱中，使用重水（D2O）作为样品。总之，在液谱中死时间的测定是一个即重要，又没有完全解决的问题。 液相色谱中溶质保留规律 羧酸同系物在键合色谱柱上的保留规律为: 在给定流动相下,容量因子与碳数关系 但液相色谱中的保留置规律了解不多. 二、液相色谱过程中的谱带扩展 影响谱带展宽也主要由涡流扩散、分子扩散和传质三部分组成，但是，由于流动相物理性质的差别很大。如 每一种扩散对板高的贡献，在GC和HPLC中是不同的。 由于溶质在液谱中扩散系数比在气谱中小 ，加上液相色谱散对板高的贡献，相对气谱是较小的，相对来说，传质的影响大些。 因此,涡流扩散/分子扩散项对谱带扩展的影响比在GC中要小. 而质量传质项对谱带影响更大. D为给定柱子的常数,u为线速,指数n为0.3-0.7. 流体力学规律: 层流体系,流体线速度沿着轴方向有一个速度分布,两壁中心速度最大,壁表面速度接近零,形成一层不流动的滞留层. 液相色谱中,滞留层存在于填料表面,也存在于多孔填料的细空中,造成质量传递的困难,导致谱带扩张. （一）径向分子扩散 由于浓度梯度的存在，而产生的浓差扩散 其中Dm：组分在流动相中扩散系数 由于Dm很小，在u 等于0.1 cm/s时，HL = 0.0001 cm。 r为柱半径。 因此，在不考虑分析速度时，可用更低的线速度。 （二）溶质在流动相流动中的扩散 填料填充的不均匀性导致的涡流扩散,对板高贡献为 流动相在颗粒间运动时,流动相沿颗粒间的空间有一速度分布.当溶质从一层扩散到另一层，速度随之变化，导致谱带扩张,其对板高贡献 为（其中Dm：组分在流动相中扩散系数） 得到giddings方程 Horvath通过解质量平衡方程得到 （三）固定相颗粒表面滞流层对扩散的影响 组分从流动相向固定相扩散时，首先必须穿过固定相