第3章 微生物资源的分离和保存（3节）.ppt

资源微生物学Resource Microbiology(第三章) 主讲人：周而勋 博士、教授、博导 （资环学院植物病理学系） 电话(办),E-mail: exzhouerxun@163.com /zyhjxy/wygkcn_ShowArticle.asp?EC_ArticleID=850 或/view/3121519.htm 第三章 微生物资源的分离和保存 第一节 分离资源微生物的基本原则 第二节 各类微生物的分离程序 第三节 资源微生物的保存 第一节 分离资源微生物的基本原则 一、选择试验样品的原则 二、样品采集 三、预处理 四、培养成分的设计原则 五、抑制剂 六、关于混合菌 一、选择试验样品的原则 1、温度、酸碱度等环境因素 （1）温度 一些特殊用途的酶，要求能耐高温或低温。 现已发现，有的微生物能在80℃以上生长，最高的可达140℃。如工业上广泛应用的?-淀粉酶，PCR广泛应用的Taq酶，就是从高温菌开发出来的。 也有的微生物能在极端低温环境下生长，如寒冷地带或冷冻库中。洗涤剂工业需要的“低温酶”就可从这些微生物中开发。 （2）酸碱度 如果需要筛选酸性酶、碱性酶，就可分别从酸性或碱性环境分离有关的微生物。 总之，在极端环境下（如极端高温、低温、极端酸碱度、高盐、高辐射、低氧）下生存的微生物必然有特殊的代谢类型，也必然产生特殊的产物。这是不可忽视的微生物资源。 2、天然基质 （1）腐生菌 自然界中的大多数微生物靠分解纤维素、木质素、几丁质、角蛋白进行生活，这为我们分离相应酶的产生菌提供了可能性。 （2）寄生菌或内生菌 有些寄生菌可引起植物病害，但其代谢物有很好的利用价值。 如引起水稻恶苗病（徒长病）的真菌可产生赤霉素（商品名“920”） ，是一种植物生长调节剂，能促进植物生长，已开发利用。 赤霉素（ “920”） 有些内生菌可产生与寄主相同的活性代谢物。如前面谈到，红豆杉（紫杉）的内生真菌——安德紫杉菌 Taxomyces andreanae ，可产生与从红豆杉（紫杉）提取的相同的抗癌药物紫杉醇。 （3）共生菌 最常见的共生菌有细菌中的根瘤菌、放线菌中的弗兰克氏菌和真菌中的菌根菌。它们是非常宝贵的微生物肥料资源，有很好的开发潜力。 （4）化能自养菌 为了利用微生物来回收金属，就要从硫磺矿、硫铁矿等天然环境中采集样品，才能够找到所需的菌种。 3、综合因素 资源开发的目标常常不是单一因素，而是许多因素的综合。 如要开发高温脂肪酶，就要到高温地区的长期炼油或长期贮油的地方取样。 又如：要开发高温纤维素酶，就要到堆沤肥的地方取样。 总之，根据不同的开发目的，综合考虑各种环境条件，找到符合要求的菌种。 二、样品采集 1、土壤采集 可采集农田、林地、草地的表层或耕作层(10-40cm)土壤。 分离细菌，土样要保持湿润；分离放线菌和真菌，土样可适当风干。 2、湖泥、海泥采集 采集湖底、海底泥可采用采泥器或重锤式取样器采集。 样品装于无菌瓶中，尽可能在短时间内用于试验。 3、水样采集 根据不同的开发目的，选择不同的水体进行采样。 水体包括江、河、湖泊、海洋、污沟以及温泉等。 不同的水体含有不同类型的微生物。 温泉水中存在的微生物数量少，有必要进行适当的浓缩。方法：用0.5μm 滤膜过滤温泉水，滤膜上微生物的浓度大大增加。 4、昆虫样品采集 在菜园、果园、茶园、林场、草地等场所采集病死的昆虫，最好是长出霉状物的死虫。 5、植物样品采集 对于根瘤菌，采集根部。 对于内生菌，可采集根、茎、叶、花、果实等各部位。 对于药用植物（中草药），通常采集药用部分。 三、预处理 1、富集培养 向样品中加入一定数量或浓度的化学物质，如纤维素、角蛋白、几丁质、果胶、维生素、氨基酸、硫磺等，混匀后，适当培养，以增加目的菌的数量。 2、高温处理 为了分离一些高温菌或芽孢杆菌，对样品进行适当的高温处理，可大大减少其它微生物的数量，而增加目的菌的分离率。 四、培养基成分的设计原则 1、开发意图放在分离过程中 如果要分离某一特定的目的菌，可使用特定的底物（碳、氮源）和培养条件，以便只分离到目的菌，而其它菌不生长。 例如，要开发低温碱性脂肪酶的产生菌，就要满足3个条件：使用脂肪作为唯一碳源，pH调到10以上，在低温下培养。 2、大剂量加入同类化合物 为了分离产生某类物质的微生物，可在分离培养基中大剂量加入该类物质，有可能使抗这类物质且产生这类物质的菌种生长起来，而不抗这类物的菌种无法生长。 例如：酿酒酵母必须对酒精有抗性。所以，在培养基中可加入高浓度的酒精。 因为，某种生物活性物质的产生菌，其基因组都是由某种物质的结构基因、调控基因和抗性基因组成的。 3、特殊成分 除了与开发目的有关的成分外，为了使目的菌生长，