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第二章 预处理及固—液分离 2.1 发酵液(培养液)的预处理 固态悬浮颗粒较小时 发酵液的相对纯化 1.改变物理性质 2. 无机离子的去除 3. 杂蛋白质的去除 4. 色素及其他物质(如多糖)的去除 2.1.1 常用的预处理方法 1.加热 2.调pH 3. 凝聚 4.絮凝 3.凝聚:破坏胶体粒子的分散状态 凝聚剂:多为阳离子型 无 机 盐 类 金属氧化物类 Al3+Fe3+ H+ Ca2+ Mg2+K+Na+Li+ 4.絮凝:使用絮凝剂在悬浮颗粒之间产生架桥作用而使胶粒形成粗大的絮凝团的过程. 阳离子型 阴离子型 非离子型 聚丙烯酰胺絮凝剂\壳聚糖、淀粉衍生物、明胶 絮凝影响因素: 2.1.2 杂质去除的方法 1.杂蛋白 等电沉淀\变性沉淀\吸附 1.不溶性多糖:加酶 2.高价离子 Fe3+::黄血盐 Ca2+ :草酸钠或草酸\磷酸 Mg2+草酸\磷酸 2.2.2 细胞破碎的方法 1.机械法： 1）液体剪切：搅拌、匀浆。 高压匀浆法 　　设备是高压匀浆器，它由高压泵和匀浆间组成，英国 ADV公司和美国Microfluidics公司均有产品出售。其破碎机理：细胞在一系列过程中经历了高速造成的剪刀，碰撞以及由高压到常压的变化从而造成细胞的破碎。 　　存在的问题；较易造成堵塞的团状或丝状真菌，较小的革兰氏阳性首以及有些亚细胞器，质地坚硬，易损伤匀浆阀，也不适合用该法处理。 研钵： 多用于细菌或其他坚硬植物材料，研磨时常加入少量石英砂，玻璃粉或其他研磨剂，以提高研磨效果。 细菌磨： 是一种改良了的研磨器，比研钵具有更大的研磨面积，而且低部有出口。操作时先把细菌和研磨粉调成糊状，每次加入一小勺，研磨20-30秒即可将细菌细胞完全磨碎。 2）固体剪切：研磨，珠磨，捣碎。 高速珠磨法 　　设备是珠后机，瑞士WBC公司和德国西门子机械公司均制造各种型号的珠磨机，其破碎机下：微生物细胞悬浮液与极细的研磨剂在搅拌浆作用下充分混合，珠子之间以及珠子和细胞之间和互相剪切、碰撞，促使细胞壁破碎，释出内含物，在珠波分离器的协助下，珠子被滞留在破碎室内，浆液流出，从而实现连续操作，破碎中，生的热量由夹套中的冷却液带走。 　　存在的问题：操作参数多，一般赁经验估计并且珠子之间的液体损失30％左右。 2.物理法： 1）超声波破碎法。 　频高于15～20KHz的超声波在高强度声能输入下可以进行细胞破碎。其破碎机理：可能与空化现象引起的冲击波和剪切力有关。超声破碎的效率与声频、声能、处理时间、细胞浓度及首种类型等因素有关。 　　存在问题；超声波破碎在实验室规模应用较普遍，处理少量样品时操作简便，液量损失少，但是超声波产生的化学自由基团能使某些敏感性活性物质变性失活。而且大容量装置声能传递，散热均有困难。 2）渗透压突变法：高渗（蔗糖，高盐等） 平衡后迅速转入低渗溶液或水中。 另外：化学渗透法 　　某些有机溶剂（如苯、甲苯）、抗生素、表面活性剂、金属螯合剂、变性剂等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性从而使内合物有选择地渗透出来。其作用机理；化学渗透取决于化学试剂的类型以及细胞壁和膜的结构与组成。 　　存在的问题；时间长，效率低；化学试剂毒性较强，同时对产物也有毒害作用，进一步分离时需要用透析等方法除去这些试剂；通用性差：某种试剂只能作用于某些特定类型的微生物细胞。  3）冻融法：反复低温冰冻，室温融化。 先将样品深冷至-15---20度使之冻固，再缓慢的融化，反复多次，多用于动物性材料。 1.常规过滤 Rc-滤饼的阻力,1/m α-滤饼的质量比阻,m/kg;单位厚度滤饼的阻力系数 m-滤饼的干重,kg A-过滤面积, m2 比阻值α是衡量各种物质过滤特性的主要指标，它表示单位滤饼厚度的阻力系数，与滤饼的结构特性有关。对于不可压缩滤饼，比阻值为常数；对于可压缩滤饼（大多数的生物滤饼），比阻值为操作压力差的函数，随着压力差的升高而增大； 　　　因此，开始过滤时应注意不能很快提高压差，通常靠液柱的自然压差进料，并应缓慢地，逐步地升高压力，一般在相当长的时间内，压力差不要超过0.05MPa，最后的压差也不超过0.3－0.4MPa。如果操作压力控制过高，由于比阻值的急剧增加，会使过滤速度很快下降，以至达到不能继续过滤的程度。 23、惰性助滤剂的使用 1）基本概念和使用方法 种颗粒均匀．质地坚硬．不可压缩的粉状或纤维状的固体，能形成疏松结构。它能使滤饼疏松，减小过滤阻力．使滤速增大，提高滤饼的刚性和孔隙率的惰性材料。方法：预涂法：涂于介质表面或预混法：按一定比例加入到料液中 2）选择要点 （1）粒度选择 （2）品种的