高效液相色谱简化.ppt

* * 3.1 概述 液相色谱与气相色谱的主要区别 1）应用范围不同。 2）操作温度不同 3）LC能分离复杂组成的样品。 3.2液相色谱法的类型及分离原理 1. L-S 吸附色谱(Liquid-solid Absorption Chromatography) 固定相使用固体吸附剂。其分离机理是根据样品中组分与吸附剂表面活性中心的吸附能力的差异进行分离的。 stop 第三章 高效液相色谱分析(High Performance Liquid Chromatography) 进样以后，样品溶解在溶剂中，被测组分（溶质）分子会从吸附剂表面取代一部分被吸附的溶剂分子，使之进入流动相，可表示如下： Xm+nSa Xa+nSm Xm—流动相中的溶质分子; Xa —被吸附的溶质分子; Sa —被吸附在吸附剂表面的溶剂分子; Sm —流动相中的溶剂分子; n—被吸附的溶剂分子数 stop 吸附平衡常数： K越大的组分，吸附剂对它的吸附能力越强，保留值越大。 L-S法适于分离不同类型的化合物和异构体。不适于分离同系物。 stop 2. L-L 分配色谱（Liquid-Liquid Partition Chromatography) 溶质在两相之间达到分配平衡时，可用下式表示平衡关系： K—分配系数； k —容量因子或分配比； Cs —溶质在固定相中的浓度； Cm —溶质在流动相中的浓度； Vs —固定相的体积； Vm—流动相的体积。 根据分配系数大小可将不同组分分离。K?, tR? 。 根据两相极性不同，L-L色谱法分为正相色谱和反相色谱。。 stop 1)正相色谱 固定相用极性大的液体，流动相用极性小的液体。 2)反相色谱 固定相用极性小的液体，流动相用极性大的液体。 该法适于分离分析极性、非极性样品、同系物、离子型化合物及不含官能团的化合物等。 stop 3.离子交换色谱法（Ion-Exchange Chromatography) X++R-Y+ Y++R- X+ X+：样品电离后生成的阳离子； R-：树脂上的固定离子基团; Y+：树脂上可交换的离子基团。 K? 表示样品组分分子与离子交换树脂的交换中心的亲合力越大，在柱中 tR?。 凡是在流动相中能够电离的物质，都可以用此法测定。 stop 4. 离子色谱法(Ion Chromatography) 固定相用离子交换树脂，流动相用电解质溶液，分离原理同离子交换色谱法。 该法用于分离分析无机阴、阳离子。 测定时，多用电导池检测器，流动相用强电解质溶液。其电导值一般比待测离子高2~3个数量级。 stop 5. 空间排阻色谱法(Gel Chromatography) 样品组分基本上按其分子大小受到不同程度的排阻先后由柱内流出而实现分离。 若用水溶液做流动相，称凝胶过滤色谱；若用有机溶剂做流动相，则叫凝胶渗透色谱。 该法可用于分离无机和有机物、简单分子、离子聚合物。 stop 3.3 HPLC 的固定相 1. L-S 吸附色谱固定相 采用吸附剂：硅胶、Al2O3、分子筛、活性炭等，分为表面多孔型（薄壳型）和全多孔型（整个颗粒全为多孔）。 多采用5?10?m的全多孔型的硅胶颗粒。 2. L-L分配色谱固定相 同GC一样，该种固定相是在担体上涂一层固定液而制成。 stop 1)表面多孔型担体 2)全多孔型担体 3.离子交换色谱固定相 固定相为离子交换树脂，由苯乙烯－二乙烯基苯交联共聚而成。在它的网状结构上引入各种不同的酸碱性基团作为 可交换的离子基团。 图3.1 stop 4.空间排阻色谱固定相 凝胶是含大量水的柔软而富弹性的物质，结构上是一种经过交联而具有立体网状结构的多聚体。 1) 软质凝胶 2) 半硬质凝胶 3) 硬质凝胶