溴氰菊酯农药残留免疫检测技术的研究.pfg.pdf

摘要 为了满足我国农产品现场及快速检测的需要、探索小分子化合物免疫化学分析的基本规律并 应用于农药残留分析实践，本论文选择应用广泛、具有广谱杀虫效果和具有代表性的拟除虫菊酯 类杀虫剂溴氰菊酯为研究对象，研究建立了溴氰菊酯农药残留的免疫分析方法，结果如下： 1．合成四种溴氰菊酯人工抗原，免疫动物制备了溴氰菊酯多克隆抗体。对溴氰菊酯分子结构 和核磁共振波谱鉴定，四种半抗原均合成成功。采用活泼酯法、碳二亚胺法以及重氮化法将半抗 由紫外光谱计算得四种半抗原与载体蛋白BSA和OVA的偶联比率基本在8：1左右。将这两种人工 分别为1．0X104、1．2×104和2．0X 104，并用饱和硫酸铵法对抗血清进行纯化。选择效价高的抗血 与其它拟除虫菊酯类农药的交叉反应率均低于1％，说明抗血清Ab0602对溴氰菊酯有高度特异性。 2．初步制备溴氰菊酯免疫亲和柱，建立了溴氰菊酯农药残留的IAC-HPLC检测方法。采用 0．01M HPLC法确定免疫亲和柱的使用条件：5mLPBS(pH7．4)平衡；上样缓冲液中甲醇浓度为 1％；上样后2mL超纯水洗涤；lmL甲醇洗脱，20mL0．01M PBS(pH7．4)再生。制备的溴氰菊酯 免疫亲和柱其柱容量≥即g，为一次性使用。建立了溴氰菊酯农药残留的IAC．HPLC方法，优化条 78％～82．1％，RSD为5．0--7．25％。 3席0备了抗多种拟除虫菊酯类农药的多克隆抗体。以3．苯氧基苯甲酸为原料合成带有连接臂 Ab0802，间接EusA测定其效价分别为1．6×105和2．0X10s，选择效价高的抗血清Ab0802进行特 异性测定，间接竞争EUSA测定结果表明，抗血清对四种拟除虫菊酯类农药都有较强的结合能力， 证明抗一类菊酯类农药通用多克隆抗体制备成功。 关键词：溴氰菊酯，半抗原，人工抗原，多克隆抗体，免疫亲和柱 Abstract In tomeettheneedfrom detectionof residuesin order and rapid pesticide agricultureproducts rulesofsmallmolecuclar wasselectedasthe thebasic of explore immunoassay,Deltamethrinobject areasfollows． results study．The artificial ofDeltamethrinwere 1．Four and was antigens synthesizedpolyclonalantibody prepared． Four and were differentchemicalandtheir haptensHp-1，Hp一2，I-ip-3Hp-4 synthesizedby pathes identified．Theresultsof‘H．NMRIR structureswere and indicatedthatthe were