nf-κb抑制对急性肺损伤大鼠趋化因子基因表达和中性粒细胞凋亡的影响.pdf

中文摘要 NF．K B抑制剂对急性肺损伤大鼠趋化因子基因表达 和中性粒细胞凋亡的影响 摘 要 目的：急性肺损伤(Acute 1unginju科，ALI)是由多种损 伤原因造成的肺损害。研究资料表明，在ALI形成的病理过 程中中性粒细胞(polymo印honuclear 重要作用。大量研究显示，当机体遭受如创伤、感染等严重 外界打击时，PMN会迅速进入肺实质大量聚集、扣押并持续 活化，这在其后发生的急性肺损伤中发挥着重要作用。目前， 有关ALI时PMN为何会大量向肺组织迁移、聚集以及进入肺 组织内的PMN如何演变，这些变化又对急性肺损伤的发生发 展有何影响等问题的研究还尚少。一本实验主要通过腹腔注射 时大鼠肺内中性粒细胞趋化因子(cytokine．inducedneutroph订 讨两者对PMN的影响及它们在ALI发病中的作用机制，后进 一步从细胞内转录因子NF。K B角度研究其对CINC表达和 PMN凋亡的调节机制，并给予抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸 盐(Ammoniumpyllrolidine 从而为临床治疗ALI提供理论依据，也为开拓新的ALI治疗思 路提供参考。 方法：1动物模型的建立及分组：健康雌性Wistar大鼠 120只，体重230．250克，购自河北省实验动物中心．。采用腹 腔注射脂多糖(LPS)方法复制动物急性肺损伤模型。动物分 中文摘要 组：120只大鼠随机分为4组：①正常对照组(C组=12只)：腹腔 1 射PDTC 20m帐g，半小时后再腹腔注射生理盐水3ml依g； ③急性肺损伤组(L组=48只)：大鼠腹腔注射LPS3m球g；④急 120mg依g进行干预，半小时后再腹腔注射LPS3m啦g。后 两组又分别以腹腔注射LPS后的2h、4h、8h和12h作观测点， 处死动物、取材，每个观测时间点组12只大鼠。 2标本的制备：因所测全部指标无法一次留取成功，故 先随机从4个实验组中各取6只大鼠行第一部分取材：制模 后，于各不同观测时间点腹腔注射10％水合氯醛3．5ml依g麻 醉，固定动物、开胸、心脏放血处死大鼠后，速取左肺叶置 液氮中速冻，一80℃冰箱保存，待测。另取右肺上、下两叶， 上叶称湿重，放入烤箱；下叶置4％多聚甲醛固定，待测。再 取各实验组剩余的6只大鼠行第二次取材：同法制模、麻醉、 处死动物，气管插管，结扎右肺支气管，取右肺下叶置4％多 聚甲醛内固定，待做病理切片；行左肺支气管肺泡灌洗，收 集全部灌洗液(bronchoalveolarlavagenuid，BALF)分离PMN。 3指标的测定：光镜观察肺组织病理变化判定制模成功 后，称重检测肺组织湿／干重比值(Wm)、I汀．PCR法检测肺组 织CINC B mI矾A表达、免疫组化法检测NF．K p65蛋白表达、 流式细胞仪检测BALF中PMN凋亡率。 4统计学分析：所有数据均以均数±标准差(x±s)表 示，采用SAS6．12统计软件分析。采用方差分析、Q检验和 直线相关进行分析，PO．05为差异有统计学意义。 结果：1肺组织病理结果：C组、P组，肺组织结构完整， 中文摘要 无炎症细胞渗出；L组，肺间隔增厚，肺泡壁断裂，大量PMN 等炎症细胞浸润，且随时间的延长炎性细胞浸润增多，肺组 织损伤程度加重。P+L组，肺组织有同L组相似的病理表现， 但对应相应时间点，肺组织损伤程度较轻。 后时间的延长W／D比值不断增高，L12h组比值达高峰 均较相应时间点L各组数值减低(PO．05)，但与对照组P组比， 各组数值仍较高(PO．05)。 3肺组织CINC 【O．03±O．013】比两者差异无意义(PO．05)；L组，各时间点 CINC 其中L2h组CINCmRNA达高峰(PO．05)，之后表达逐渐减低； P+L干预