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P-糖蛋白在慢性蠢痛大置脑组织的表达及药物干预的研究 中文摘要 P一糖蛋白在慢性癫痫大鼠脑组织的表达及 药物干预的研究 中文摘要 癫痫是一种常见的神经系统疾病，发病率占总人口的I-2％，是一种慢性脑功能 紊乱．在过去的20年中，尽管不断有新的抗癫痫药(AED)投入临床应用，但仍有 20．30％为难治性癫痫，且增加死亡率、致残率和社会家庭经济负担．耐人寻味的是， 如果患者对一种AED耐药，他往往对其他AED也不敏感，即使这些药物的作用途 经、作用机制不同．这种现象与肿瘤化疗中出现的多药耐受现象相似，因此人们猜 测多药耐受机制可能在此起作用．最近研究发现血脑屏障内皮细胞上存在多种药物 细胞内的药物结合而泵出至血循环，限制了脂溶性药物在脑内的蓄积。保持脑部内 环境的稳定，但其过度表达却能导致脑内药物浓度降低。在正常脑组织，P-糖蛋白 主要表达在脑毛细血管内皮细胞的腔面，而在脑实质如胶质细胞以及神经元难以监 测到P．糖蛋白．在病理情况下，P．糖蛋白却可在胶质细胞甚至神经元表达．P-糖蛋 白表达上调受很多因素影响，如癫痫发作的强度、时程、长期服用抗癫痫药等，但 还存在着争议．鉴于此，本课题拟建立慢性癫痫模型，观察P．糖蛋白的表达与癫痫 发作及长期应用抗癫痫药的关系，以及P．糖蛋白在调节脑细胞外液AED浓度的作用， 从而探讨联合应用P．糖蛋白抑制剂的价值，为临床难治性癫瘸的治疗提供新的方向． 一、建立慢性癫痫模型 1．目的：建立慢性癫痫模型，观察预防性服用卡马西平对癫痫点燃过程的影响。 一 2．方法：戊四氮点燃模型。分为①正常对照组，②P1fz组：腹腔注射戊四氮 后予PTZ腹腔注射(35mg／kg)．大鼠癫痫发作的强度，按Recine标准评定． 3．结果：①本实验成功地建立了慢性癫痫模型；②预防性服用卡马西平并不影响癫 痫点燃过程。 P-糖蛋白在慢性癜瘸大曩脑组织的衰达及药物干预的研究 中文摘要 二、慢性癫痫大鼠海马P糖蛋白表达研究 1．目的：观察大鼠海马P．糖蛋白的表达及P．糖蛋白表达与癫痫发作及长期应用抗癫 痫药的关系． 2．方法：将实验动物随机分为正常对照组、PTZ组及CBZ组，①正常组：lO只大 鼠，每日腹腔注射等量生理盐水．②P1呓组：30只．大鼠每日腹腔注射戊四氮 组：卡马西平混悬液灌胃组，随机分为小剂量组(20mg／toor,／a，2次，d)、中等剂量 R／a)，每剂量组随机分为 组(40mg／Ioog／a，2次，d)和大剂量组(80mr,／toog／a，2 1w组，2w组和Im组，每组10只．在不同时间点，处死大鼠，断头取脑，分别行 P一印免疫组化染色及RT-PCR． 3．结果：①光镜下正常大鼠海马组织切片复染后细胞形态完整，细胞核染成均一的 蓝色未见棕黄色P-gp阳性染色：PTZ组大鼠海马组织中可见毛细血管腔染成棕黄色， 并有少量胶质细胞染成棕黄色，而神经元无染色．大鼠点燃后阳性细胞数随时间延 长而增加，各组间具显著性差异(po．01)；CBZ组；小剂量组及中等剂量1w组海 马组织中无阳性P．gp信号，中等剂量2w及lm时及大剂量组均可见阳性细胞，且 随时间延长及剂量增加，阳性细胞数增多，具统计学差异(po．01)。②RT-PCR示 慢性癫痫鼠海马组织中mdrlMRNA较正常大鼠升高；小剂量组与正常组相比无明显 差异，中等剂量及大剂量CBZ组mdrlMRNA水平升高。 三、P．糖蛋白对慢性瘢痫大鼠海马细胞外液卡马西平浓度的调节作用研究 1．目的：观察P．糖蛋白对海马细胞外液卡马西平浓度的调节，评估维拉帕米的干预 作用． 2．方法：采用微透析技术，按实验需要将实验动物分为正常、PTZ组及维拉帕米干 预组，每组10只大鼠，分别测定海马细胞外液、血清卡马西平浓度，并计算细胞外 液／血清比值。 3．结果：①慢性癫痫大鼠海马细胞外液卡马西平浓度明显低于正常大鼠，而两组血 浓度相差不大；②通过探针局部灌注Verapamil可提高CBZ在脑中的浓度，使得其 与血中的浓度比值也相应提高。