p73α与143-3σ在不同乳腺癌细胞系中的表达及其相互作用的研究.pdfVIP

中文摘要 p73Q与14_3—3o在不同乳腺癌细胞系中的表达及其 相互作用的研究 摘 要 目的：肿瘤抑制基因p53在1979年被首次报道，是迄今 为止发现的与人类肿瘤相关性最高的基因。野生型p53蛋白 在调节细胞生长，抑制恶性肿瘤发展中起着重要的作用。近 上高度同源，功能上也存在着非常复杂的关系，这一类基因 a是 称为p53基因家族，但其功能尚不完全明了。14—3—3 14—3—3基因家族中唯一一个能够被DNA损伤所诱导的成员。 作为细胞周期负调控因子，14—3—3o的活化可以使细胞周期 停滞于G2期，抑制细胞的生长。本研究采用多种不同的实验 a与14—3—3 方法，研究了不同p53状态的乳腺癌细胞系中p73 o的基因表达情况，及p73Q与14—3—3o在基因水平上的相 互调节作用。目的在于探索p73Ⅱ与14—3—3o在细胞增殖及 Q与14—3—3o之间的相互关系。 癌变中的作用，及p73 方法：本研究选用p53野生型人类乳腺癌细胞系MCF-7， blot 通过基因转染，研究MDA一髓一436细胞系中，p73q对p53有 中文摘要 否替代作用，能否诱导p53的下游基因14—3—3o的表达：然 后又运用基因克隆，荧光索酶报告剂分析以及克隆形成实验 Q和14—3—3o之间的相互作用及关系。 的方法研究p73 结果：1MTT分析结果：五种乳腺癌细胞系，在ADR(1 u 98．62％。 2 u ADR处理前后14—3—3o的表达状况：ADR(1M)处理 24小时以后，14～3—3o的基因转录水平和蛋白表达水平在 现14—3—3o的表达。 3 p73 Q的转录水平和蛋 细胞系中没有发现p53蛋白的表达，而p73 u 白表达水平在ADR(1M)处理24小时以后均轻度上调。 Q对14—3—3 4转染p73 o表达的影响：在MDA_MB一436细 Q之后，14—3—3o的基因转录水 胞系中，转染进外源性的p73 平和蛋白表达水平均呈现大幅度升高。 6转染14—3—3 Q的影响：荧光素酶报告剂分析 o对p73 显示，在H1299细胞系中，跟内参照相比，单独转染25ng的 p73a可以使Bax和p2l””’的转录活性分别增加5．688倍和 9．061倍；共转染恒定量(25ng)的p73Q和逐渐增加量(100ng， 中文摘要 200ng，400ng)的14—3—3o之后，Bax的转录活性和内参照 o之后，Bax和p21”1的转录活性和内参 染400ng的14—3—3 照相比基本没有变化。RT—PCR结果也显示，在H1299细胞系 巾，共转染p73Ⅱ和14—3—3o之后，p2l””和Bax的转录活性 Q时的转录活性高。在H1299细胞系中，共转 比单独转染p73 染p73Ⅱ和14—3—3o之后，p73Ⅱ的表达水平比单独转染p73 o