第二章酶促反应动力学解析.ppt

第一章 酶促反应动力学 课程主要内容 第一章 酶促反应动力学(4) 酶促反应动力学特点；酶促反应动力学基础；米氏方程；竞争性抑制酶促反应动力学；非竞争性抑制酶促反应动力学；产物抑制酶促反应动力学；底物抑制酶促反应动力学；多底物酶促反应动力学；酶的失活动力学 第二章 微生物反应动力学(6) 影响微生物生长和代谢的各种因素, 微生物反应过程计量学, 得率系数，比生长速率概念及计算, 微生物生长的非结构模型，基质消耗动力学,产物合成动力学 第三章 微生物反应器操作(5) 微生物反应器操作的分类及比较 分批式操作：生长曲线及状态方程式 流加式操作：流加操作的分类、指数流加数学模型 连续式操作：连续操作存在的问题及应用 第四章 动植物细胞培养动力学(2) 动植物细胞培养的特性，植物细胞培养及反应动力学，动物细胞培养及反应动力学 第五章 生物反应器中的传质过程(4) 流体流变学特性, 发酵液的流变学特性, 氧传递理论，体积溶氧系数的测定, 影响kLa的因素及其提高措施 第六章 生物反应器(3) 生物反应器设计基础，常见的生物反应器, 生物反应器放大的目的与方法 第七章 生物反应工程领域的拓展(6) 超临界生物反应，双液相生物反应、代谢工程、系统生物学等生物应工程领域的拓展介绍 引言：碱性果胶酸裂解酶活力测定 取适量稀释一定倍数的粗酶液和2 ml 1% (w/w)果胶溶液(pH 9.6)分别置于两个试管中，于55℃水浴预热5 min，然后吸取1 ml粗酶液加入到果胶溶液中，并使它们充分混匀，准确反应10 min。取上述反应混合物1 ml 加入9 ml 0.01 mol/l HCl终止反应，在235 nm处测定吸光值，以灭过酶活的酶液作为空白对照。 一个标准酶活单位定义为：每分钟使果胶裂解产生1μmol的不饱和聚半乳糖醛酸所需的酶量。不饱和聚半乳糖醛酸在235nm处的摩尔吸光系数为4600Lmol-1cm-1。 U =（A/4600）×106×10-3×3×10×（1/10）×n = A×n×(30/46) 式中：U-----------酶液的酶活力， U/mL A —————OD值 n ———— 酶液稀释倍数 2.1 酶促反应动力学的特点 2.1.1 酶的基本概念 2.1.2 酶的稳定性及应用特点 　 酶是以活力、而不是以质量购销的。 酶有不同的质量等级：工业用酶、食品用酶、医药用酶。酶的实际应用中应注意，没有必要使用比工艺条件所需纯度更高的酶。　　　 经典酶学研究中，酶反应速率的测定是在反应的初始短时间内进行的，并且酶浓度、底物浓度较低，且为水溶液，酶学研究的目的是探讨酶促反应的机制。 工业上，为保证酶促反应高效率完成，常需要使用高浓度的酶制剂和底物，且反应要持续较长时间，反应体系多为非均相体系，有时反应是在有机溶剂中进行。 2.2 均相酶促反应动力学 2.2.1 酶促反应动力学基础 　　可采用化学反应动力学方法建立酶促反应动力学方程。 一步简单反应　　　　　 2.2 均相酶促反应动力学 2.2.1 酶促反应动力学基础 　　可采用化学反应动力学方法建立酶促反应动力学方程。 对酶促反应 　　　　　 ，有： 对连锁的酶促反应，　　　　　　 2.2.2 单底物酶促反应动力学 2.2.2.1 米氏方程 　　 根据酶－底物中间复合物假说，对单底物酶促反应　　 ，其反应机制可表示为：　 快速平衡法推导动力学方程： 几点假设： （1）CSCE，中间复合物ES的形成不会降低CS。 （2）不考虑产物P的可逆反应。 （3） 为快速平衡， 为整个反应的限速阶段，因此ES分解成产物不足以破坏这个平衡。 解之，得 稳态法推导动力学方程： 几点假设： （1）CSCE，中间复合物ES的形成不会降低CS。 （2）不考虑这个可逆反应。 （3）CSCE中间复合物ES一经分解，产生的游离酶立即与底物结合，使中间复合物ES浓度保持衡定，即 。 解之，得 米氏方程 对米氏方程的讨论： 当CSKm时， 　　 ，属一级反应。 当CSKm时，　　，属零级反应。 当CS＝Km时，　　。Km在数量上等于反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。 引言：碱性果胶酸裂解酶活力测定 取适量稀释一定倍数的粗酶液和2 ml 1% (w/w)果胶溶液(pH 9.6)分别置于两个试管中，于55℃水浴预热5 min，然后吸取1 ml粗酶液加入到果胶溶液中，并使它们充分混匀，准确反应10 min。取上述反应混合物1 ml 加入9