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论RECK在宫颈癌中的表达及意义 摘要： 目的 检测基质金属蛋白酶抑制剂RECK在宫颈癌组织中的表达，探讨其对血管生成的影响。方法 实验组(宫颈癌组织)26例以及对照组(正常宫颈上皮、慢性宫颈炎组织)24例，应用SP免疫组化法，经细胞计数及灰度测量检测RECK的表达，计数微血管密度(MVD)的值。比较二者的差异性。结果 RECK的表达在实验组的灰度值(7 848.74±1 276.04)明显低于对照组(657 282.8±30 681.16)(P0.05);RECK在宫颈癌中表达与肌层浸润深度、盆腔淋巴结转移有关(P0.05)，而与临床分期、组织学分型、组织学分级、脉管浸润无关(P0.05)。MVD值在实验组(19.461 5±3.071 8)明显高于对照组(12.000 0±2.662 9)(P0.05);二者呈负相关关系，r=-0.397,P=0.049 5。结论 RECK在宫颈癌组织中低表达;REKC的高表达能抑制宫颈癌肿瘤血管生成。 关键词： RECK; 基质金属蛋白酶; 宫颈癌; 微血管密度 恶性肿瘤侵袭正常组织及转移必须突破细胞外基质(ECM)尤其是基底膜屏障。而基质金属蛋白酶(MMP)在ECM及基底膜的降解过程中起到主导作用，能够促进肿瘤的侵袭转移和血管生成。MMP抑制剂作为肿瘤治疗的新药物早已引起人们的重视。RECK (reversion inducing cysteine rich protein with kazal motifs) 基因是近年来发现的新型MMP抑制剂，其转录后水平抑制MMP特别是MMP2、MMP9以及膜型基质金属蛋白酶(MT1MMP /MMP14)的表达与活性，主要抑制肿瘤的血管生成以及侵袭转移〔1〕。国内外学者通过对乳腺癌、结肠癌、前列腺癌等组织的体外实验研究表明：在恶性肿瘤组织中，RECK的表达显著降低，并与肿瘤及淋巴转移有关;但对RECK与肿瘤的分期及分化程度关系意见不一致〔2，3〕。本实验主要探讨RECK在宫颈癌中的表达情况，及与宫颈癌发展、侵袭及转移的关系以及对血管生成的作用，为宫颈癌的基因靶向治疗建立一个新的起点。 　　1 资料与方法 　　1.1 标本来源 选择2007年3月～2008年3月在吉林大学第二医院、吉林大学第一院、长春市妇产医院、省肿瘤医院进行手术治疗的50例患者的宫颈组织。分为试验组及对照组。试验组26例：经病理组织证实为宫颈癌，术前患者均未行放疗、化疗和免疫治疗，年龄33～72岁，平均年龄(48±6.52)岁。其中期19例，a期4例，b期2例，a期经2个疗程化疗后1例;高分化9例，中分化13例，低分化4例;鳞癌21例，腺癌4例，腺鳞癌1例;盆腔淋巴结转移2例;脉管转移2例。对照组24例，包括癌旁组织16例、慢性宫颈炎8例。两组在年龄上无统计学差异。 　　1.2 试剂 鼠抗人RECK蛋白多克隆抗体购自美国Santa Cruz生物制品公司，鼠抗人因子单克隆抗体购自福州迈新生物技术有限公司，其他试剂采用进口或国产分析纯试剂。 　　1.3 方法 　　1.3.1 标本采集 广泛性子宫切除或全子宫切除标本，立即用4预冷双刃刀片从宫颈组织上切取1 cm3大小组织，投入10%甲醛溶液中，4保存，供制备光镜标本用。组织经固定、脱水、包埋、5 μm连续切片。 　　1.3.2 实验方法 将切片进行HE染色和SP免疫组化。用Imagepro plus 6.0做灰度分析(IOD)，半定量计量RECK阳性率及IOD值，计数MVD值。 　　1.3.3 结果判定 RECK细胞计数判断标准：400倍镜下观察，在肿瘤细胞膜和/或细胞质有黄棕色或玫瑰红色颗粒沉着为RECK阳性染色。根据染色程度和染色细胞百分率进行评分：基本不着色为0分，淡为1分，适中为2分，深为3分;着色细胞占计数细胞百分率≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，≥51%为3分。将平均着色程度得分与平均着色细胞百分率得分相乘为其最后得分：≤1分为阴性(-)，2～3分为(+)，4～6分为()，6分为()。MVD计数结果判定标准：细胞间质内孤立的棕黄色血管内皮细胞或细胞簇或血管腔内径小于8个红细胞直径且管壁无肌层者代表1条单独的微血管。先在低倍(×100)视野下找到肿瘤组织内微血管密度最高的区域(热点)，然后在高倍(×400)视野下计数5个视野的微血管数，取其平均值。 　　1.4 统计学方法 使用SPSS11.0进行数据分析，RECK检测结果细胞计数以(-～)表示，灰度分析以IOD均值及标准差表示，MVD结果以均值及标准差表示。组间进行独立样本χ2检验、t检验及双变量相关性分析。 　　2 结 果 　　2.