论S100A2在喉鳞状细胞癌中的表达及其意义.docVIP

论S100A2在喉鳞状细胞癌中的表达及其意义 摘要： 目的 研究S100A2蛋白在喉鳞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,lscc)中蛋白表达的情况，探讨其在喉鳞癌发生、发展、浸润转移中的作用。方法 收集40例泸州医学院附属医院耳鼻咽喉-头颈外科2005年1月至2007年5月手术切除经病理诊断证实为喉鳞癌（LSCC）患者病理组织石蜡标本作为实验组，另取40例同期手术切除经病理证实无肿瘤浸润的癌旁喉粘膜组织标本作为对照组。所有石蜡标本按4μm连续切片2张,其中1张HE染色,另外1张用免疫组织化学染色SP法检测S100A2蛋白的表达。以试剂盒内阳性切片作为阳性组，用磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer Solution,PBS）代替一抗做阴性对照。具体实验步骤参照试剂盒说明，显微镜下观察喉鳞癌组织及无肿瘤浸润的癌旁粘膜组织各组细胞中S100A2的分布情况并计数其阳性表达率。结果 喉鳞癌及正常喉粘膜组织中S100A2蛋白表达位于胞核和胞浆，呈黄色至棕黄色着色。40例无肿瘤浸润的癌旁喉粘膜组织中S100A2蛋白全部为阳性表达，表达率为100%(40/40)，40例喉癌组织中S100A2蛋白表达率为78%（31/40），阳性表达低于无肿瘤浸润的癌旁喉黏膜（P0.05）；S100A2蛋白在不同分化程度喉鳞癌中的阳性表达率为：高分化组表达阳性率为91%，中分化组表达阳性率为90%，低分化组表达阳性率为25%。而高、中分化组间无明显差异（P=0.876），高、中分化组高于低分化组（P0.05），表明S100A2蛋白表达率不同于喉鳞癌分化程度；在无颈淋巴结转移的喉鳞癌组织中S100A2蛋白阳性率为88%，表达率高于有颈淋巴结转移的喉鳞癌组织阳性表达率54.5%（P0.05）；TNM分期，T1～T2期中S100A2蛋白的表达阳性率为78.6%，T3～T4期中S100A2蛋白的表达阳性率为76.9%，两者比较，无明显差异（P=0.905）；不同年龄组患者喉鳞癌组织中，60岁以上组S100A2蛋白阳性表达率为78.6%，60岁和60岁以下组S100A2蛋白阳性表达率为75.0%，两者差异水平不显著（P=0.804）。结论 （1）S100A2蛋白基因在喉鳞癌中存在表达缺失或下调，与喉鳞癌分化程度、淋巴结转移有关，与TNM分期及患者年龄无关，推测其在喉鳞癌的发生发展及浸润转移中起重要作用。(2)S100A2在喉鳞癌中为抑癌基因，对S100A2蛋白表达的检测，可能成为判断喉鳞癌细胞生物学行为的参考指标之一。 关键词： S100A2；喉鳞癌；免疫组织化学方法 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料与仪器 　　1.1.1 资料 收集40例泸州医学院附属医院耳鼻咽喉-头颈外科2005年1月至2007年5月行手术切除后经病理学诊断为喉鳞状细胞癌（lscc）的存档蜡块。所有病例术前均行喉部高分辨率CT检查，均未行放化疗治疗。40例喉鳞癌中，男性39例，女性1例,年龄45～71岁，平均61.8岁；病程2～36个月。将病例按年龄、不同分化程度、有无颈淋巴结转移、TNM分期进行分组。年龄以60岁为界，分为两组；按组织病理学分级分为高分化鳞癌22例，中分化鳞癌10例，低分化鳞癌8例；有淋巴结转移22例，无颈淋巴结转移18例；按1997年国际抗癌协会（UICC）制定的TNM分期， T1～T2期有14例，T3～T4期有26例;将40例同期手术切除经病理证实无肿瘤浸润的癌旁喉黏膜标本作为对照组。 　　1.1.2 主要实验试剂 兔抗人多克隆S100A2抗体（购于sigma公司），SP免疫组化试剂盒、DAB显色盒购于（北京中杉生物技术有限公司）。 　　1.1.3 主要实验仪器 轮转式切片机（Leica-RM2035 产于德国），OLYMPUS显微镜（BX-50，日本），CS2002-1恒温干燥箱孵育盒 （重庆四达实验仪器厂），SAYYO低温冰箱-20(MDF-330.产于日本），病理图像分析处理系统(GD-8,中国)。 　　1.2 实验方法 所有样本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，切片厚度为4μm。免疫组化染色按试剂盒说明进行，组织切片经脱蜡、水化、微波处理，进行抗原修复，阻断内过氧化物酶30 min ，PBS 冲洗3 次，每次3min，非特异性血清封闭30 min，PBS 冲洗3 次，每次3 min，抗原一抗4孵育过夜，PBS 冲洗3 次，每次3 min，二抗孵育30 min，PBS 冲洗3 次，每次3 min，DAB 显色，苏木素复染细胞核，脱水，透明，封片，镜检及摄像。采用预实验反复多次证实均呈阳性的组织切片为阳性对照，空白对照以PBS代替一抗。 　　1