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论TSA对甲状腺鳞癌细胞株SW579增殖的影响 摘要： 目的 探讨曲古抑菌素A（trichostatin A，TSA）对甲状腺鳞癌细胞株SW579生长增殖的影响。方法 分别以终浓度为25、50、100、200、400 nmol/L的TSA作用于SW579细胞株，在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化；采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测细胞的体外增殖、吖啶橙染色荧光显微镜观察细胞形态及细胞凋亡、流式细胞术检测细胞凋亡率的改变。结果 TSA作用后对细胞的增殖有抑制作用；吖啶橙染色后光镜下观察发现有典型的凋亡小体生成；流式细胞仪分析凋亡率随TSA浓度的升高而升高(P＜0.05)。结论 不同浓度的TSA可抑制SW579细胞增殖，促进细胞凋亡，且呈剂量依赖性。 关键词： 曲古抑菌素A 甲状腺鳞癌 细胞增殖 细胞凋亡 曲古抑菌素A(Trichostatin A，TSA)源自链霉素代谢产物，是一种氧肟酸类非竞争性可逆的组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，HDAC)抑制剂，也是四大类HDAC抑制剂的代表药物之一。有研究表明，HDAC抑制剂TSA和丁酸钠均可使人结肠癌细胞系SW1116和人直肠癌细胞系Colo-320的细胞周期阻滞于G1期。TSA在低于微摩尔浓度时即可通过提高p21waf1的转录阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡，以抑制胰腺癌细胞的生长，TSA还可活化胰腺癌细胞系BxPC-3和MIA PaCa-2中的转化生长因子β受体II(TβRII)。TSA可在体外抑制人肝癌细胞系HepG2细胞增殖，使Huh-7细胞的细胞周期阻滞于G0／G1期并诱导凋亡。另外，人们在对人类膀胱癌细胞T24的研究中发现，HDAC抑制剂SAHA可诱导CDK抑制因子P21/WAF1的转录，从而使癌细胞停止增殖，趋向分化。已有研究报道TSA对肝癌、胃癌、宫颈癌、前列腺癌及神经母细胞瘤等多种肿瘤细胞具有抗肿瘤作用［1］，但对甲状腺癌细胞的影响国内外研究甚少，对甲状腺鳞癌尚无报道。本研究旨在探讨TSA对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞增殖与凋亡的影响。 1 材料与方法 1.1 主要试剂与仪器 TSA (SIGMA公司)用二甲基亚砜（DMSO）充分溶解，配成4×10-4 mol/L的贮备液，-20 避光保存。使用时用细胞培养液稀释到所需浓度。AnnexinV—FITC凋亡检测试剂盒购自晶美生物工程有限公司；L15培养液(SIGMA公司产品)按照说明用三蒸水配置，100 U/mL青霉素、100 μg/mL的链霉素，调整pH值至7.0～7.2，0.22 μm微孔滤器无菌过滤，4 冰箱保存。使用前加入10% 的胎牛血清。四甲基偶氮唑蓝（SIGMA公司）；倒置显微镜(JAPAN OLYMPUS TOKYO)、流式细胞仪(美国贝克曼库尔特有限公司)、荧光显微镜(JAPAN OLYMPUS TOKYO)L15培养液（SIGMA公司）；Multiskan Ascent自动酶标检测仪。 1.2 细胞培养及实验分组 甲状腺鳞癌细胞株SW579购自上海生命科学院细胞和生物化学研究所。该细胞株在L15培养液中、饱和湿度、37 、无CO2 孵箱中培养。当细胞汇合至培养瓶底面积80%左右时进行传代培养。以105/mL浓度接种于25 cm2的培养瓶中，24 h待细胞贴壁后细胞处于对数生长期时给药，使TSA终浓度分别为25 、50 、100 、200、400 nmol/L，加入最大溶解剂量的DMSO为对照组［DMSO浓度小于0.1%(V/V)，对细胞生长无影响］。 1.3 倒置显微镜下观察细胞形态 在药物处理后48 h后取出培养瓶，在倒置显微镜下观察细胞形态学变化，并拍摄记录细胞形态。 1.4 MTT法检测细胞生长抑制率 取对数生长期的细胞按1×105/L接种于96孔细胞培养板中，每孔200 μL，实验组分别加入不同浓度的TSA 20 μL (终浓度分别为25、50、100、200、400 nmol/L)，对照组加入最大溶解剂量的DMSO，每组设8个平行孔。置于37 培养箱内培养，作用48 h后，每孔加入20 μl MTT液(5 g/L，以PBS缓冲液配制)，继续培养4 h后，弃上清，每孔再加入二甲基亚砜(DMSO)150 μL，震荡10 min，用DG-3033型酶联免疫检测仪测定490 nm吸光度(A)值。用下面的公式计算抑制率。抑制率(％)=(1-实验组A 值/对照组A)×100%。 1.5 荧光显微镜下观察细胞凋亡情况 取对数生长期的细胞按1×106/L接种于24孔细胞培养板中，TSA作用48 h后，取出培养板，去除培养液，用PBS洗细胞2～3次，