第五章 单倍体细胞培养讲解.pptVIP

5 单倍体细胞培养 5.1单倍体的起源和遗传行为 5.1.1单倍体的起源: 主要有4种方法可以诱发植物产生单倍体： （1）种间和属间杂交：远缘花粉刺激 。远缘杂交中，异种植物虽然不能与母本授粉，受精，由于远缘花粉的诱导作用，卵细胞在没有受精的情况下受刺激而发育成胚。如马铃薯，大麦，小麦，玉米。 （2）物理照射和化学诱变：花粉用射线照射后失去了受精能力， 然后与母株授粉，卵细胞在花粉的刺激作用下进行孤雌发育，从而产生单倍体。如烟草，小麦，金鱼草。 方法：射线、二甲基亚砜、萘乙酸、马来酰肼、秋水仙素。 （3）双生苗的筛选：有些植物可产生多胚种子，即两个或多个胚被共同的种皮包裹着，这些种子可产生单倍体-单倍体，二倍体-二倍体和单倍体-二倍体植株。在Capiscum中,双生苗的频率受母本基因型控制。通过筛选可以提高双生苗的频率。 （4）花药、花粉培养：未授粉的子房、胚珠离体培养 5 单倍体细胞培养 5.1.2单倍体的遗传行为 一倍的单倍体只有一个染色体基数(X) ，减数分裂时染色体不能配对，分离极不正常，但具有一定同源关系的染色体可以部分配对，从而可以对染色体的演化过程进行研究。 5 单倍体细胞培养 5.2单倍体的应用价值 （3）排除杂种优势对后代选择的干扰 （4）遗传研究的良好实验材料体系 （5）突变体的筛选 （6）消除致死基因 （7）选育新型自交系 （8）遗传转化的受体材料 （9）基因表达研究的良好材料 5 单倍体细胞培养 5.3离体培养条件下的小孢子发育 5.3.1小孢子的正常发育 5 单倍体细胞培养 5.3离体培养条件下的小孢子发育 5.3.1小孢子的正常发育 5 单倍体细胞培养 5 单倍体细胞培养 5 单倍体细胞培养 5 单倍体细胞培养 5 单倍体细胞培养 5 单倍体细胞培养 5 单倍体细胞培养 5 单倍体细胞培养 5 单倍体细胞培养 5 单倍体细胞培养 5 单倍体细胞培养 5 单倍体细胞培养 5 单倍体细胞培养 5 单倍体细胞培养 5 单倍体细胞培养 5 单倍体细胞培养 5 单倍体细胞培养 * * 5 单倍体细胞培养 5.2单倍体的应用价值 （1）在植物育种中使后代迅速纯合 母本 ⅹ 父本 F2 F1 品系比较试验 区域试验 品种 花药培养 花粉植株 加倍 选择鉴定 5-8代 5 单倍体细胞培养 （2）提高选择效率 AAbb(母本） aaBB(父本） Ab(雌配子） aB(雄配子） AaBb(F1） 常规杂交育种 不同类型卵 AB Ab aB ab 精子 AB Ab aB ab 单倍体育种 AABB AABb AaBB AaBb AABb AAbb AaBb Aabb AaBB AaBb aaBb aaBB AaBb Aabb aaBb aabb AABB AAbb AAbb aaBB aabb 花粉的分裂增殖方式有四种类型: 1)营养细胞发育途径; 2)生殖细胞发育途径 ; 3)营养细胞和生殖细胞并进发育途径 ; 4)花粉均等分裂途径 5.4花药培养 取材 预处理 消毒 接种 培养方式和培养条件 花粉植株的诱导 壮苗和移栽 5.4花药培养 5.4.1花药培养 操作技术 5 单倍体细胞培养 5.4.2 影响花药培养的因素 供试植株的年龄：多数情况下幼年植株优于老年植株,可甘蓝型油菜却相反. 花粉发育时期：因物种而异.在烟草中, 处于第一次有丝分裂期的花粉效果最好,而在禾本科和芸苔属中,单核早期最好. 花蕾和花药的预处理：对于有些物种,培养前对花药和花蕾进行预处理,能显著提高培养效果.如大麦花药,在40C 处理28 天,或70C 处理14 天,能收到最好效果. 除温度处理以外,其它一些因素的预处理有时也能收效, 如用激素处理供体植株可以提高土豆花药单倍体的形成能力.用E MS,酒精,射线,降低气压,高低渗处理进行预处理的也有报道. 供试植株的生长条件：在烟草中,短光周期(8h)和高光强(16000lux)较有利.而大麦,低温(120℃)和高光强(20000lux)较好.芸苔属的一些种(油菜) ,高光强和一定的温度变化较有利,对于甘蓝型冬油菜来讲,植株在150 ℃ 下生长比200 ℃ 下好.对烟草植株进行氮饥饿处理可以提高花药培养效果. 5 单倍体细胞培养 5.4.2 影响花药培养的因素 活性炭的作用：培养基中加入活性炭可以使烟草雄核发育的花药数由15%增加到45%。 供体植株的基因型：小孢子能否进行胚胎发生受基因控制,所以, 供体植株的基因型对花药培养效果有重要影响. 培养基:花药培养时往往需要一定的渗透压, 成熟花粉是二细胞结构的往往需低浓度糖,而成熟花粉为三细胞结构的植物往往需高渗条件,如油菜小孢子培养时,糖的浓度可用到13-17%.培养基