第四章生物技术讲解.pptVIP

第三节 （五）、植物转座子的激活 高等植物中存在多种转座因子系统，在组织培养中由于外源激素等因子诱导激活转座因子，从而造成有关基因表达的广泛变异； 转座因子具有使不活动基因活化或使活跃表达基因失活的特性，因此在体细胞无性系变异中，不仅有隐性基因被激活，也有显性基因被激活，表现出显性基因突变频率远高于物理化学因子诱发的变异率； 转座因子可诱发位于中度或高度重复序列的多拷贝基因中不表达的拷贝活化，提高这些基因的表达强度。 本节完 第四节 体细胞无性系变异的筛选及检测 一、体细胞无性系变异的筛选 肉眼观察法 正向选择法： 负向选择法 分子标记选择法 一步筛选：最低致死剂量 多步筛选：采用半致死剂量 第四节 对营养缺陷性的突变细胞，采用负选择系统 直接选择法，突变细胞能够在有毒或有害培养基上生长，如抗性突变体，激素自养型突变体等。 筛选的材料对象可以是原生质体、愈伤块、悬浮培养物和花粉/小孢子培养物。 根据上述计算结果作图，找出半致死剂量及使全部细胞均杀死的最低剂量。一般选择近于杀死全部细胞的剂量进行突变体筛选。 具体做法是：每瓶接种一定重量的愈伤组织（如，0.25g），不同浓度抑制剂处理和对照均培养一定时期（如10d），然后收集细胞称重，并计算相对鲜重增长率： 鲜重增长率(%) =( Xn - X0)/ (Xc – X0) × 100 (Xn: 浓度为n的均重；Xc：对照均种；X0：接种量) 第四节 筛选压的确定: 二、体细胞无性系变异的检测 （一）形态学检测 细胞器官分化或体细胞胚胎发生能力的改变 长期继代培养容易导致植物愈伤组织丧失胚胎发生能力 第四节 再生植株形态特征和性状的变化 第四节 （二）、细胞学检测 1、细胞学压片检测染色体形态和数目,以及核型分析检测结构变异 染色体组分析或核型分析：染色体长度，着丝粒位置，长短臂比，随体的有无 第四节 2、核DNA相对含量和倍性检测 流式细胞仪(Flow cytometer，FCM)是一种将现代免疫荧光技术与流体力学、激光学、应用电子学和计算机等学科的先进技术相融合用于基础与临床细胞生物学研究的一项高科技实验设备。 快速测量细胞的物理或化学性质, 如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等, 并可对其分类收集 第四节 A 1 2 1 2 B 实生苗 再生植株 （四）分子生物学检测 主要通过无性系的RFLP 多态性、SSR 和RAPD 多态性变化来检测变异的存在 （三）同工酶酶谱分析生理生化表现型及蛋白水平 第四节 本节完 第五节 体细胞无性系变异的影响因素及育种应用 一、 体细胞无性系的影响因素 第五节 （一）、基因型基因型：植物种基因型间变异频率差异较大。倍性水平：多倍体和染色体数目较多的植物其变异频率比二倍体和单倍体高。 第五节 （二）、外植体来源以分生组织为外植体的再生植株通常可以维持供体植物的典型性，体细胞变异频率很低。以分化组织为外植体的再生植株容易发生体细胞变异，其频率与分化程度有关。 第五节 （四）、培养基成分 培养基激素浓度和不同激素配比对再生植株的染色体倍性有一定的影响。 激素引起的变异大多为倍性增加。 少数情况下激素引起类减数分裂而使倍性减少。 （五）、继代次数 由继代次数引起的体细胞变异普遍存在。一般来说，继代时间越长，继代次数越多，细胞变异的机率就越高。 （三）、再生途径经过愈伤组织成苗的变异大 改良作物品种 拓宽种质资源 遗传学研究 发育生物学研究 代谢研究 加强外源基因向 栽培种的渐渗 二、 体细胞无性系变异的育种应用 第五节 当前在农业上，体细胞突变体筛选技术研究主要集中在抗病、 抗盐、抗除草剂、抗低温、高温等逆境胁迫的突变体筛选。 另外，在提高作物营养物质（如蛋白质、赖氨酸等）改变作物品质方面也取得了一定进展。 第五节 （一）、农艺性状改良方面的应用 1. 株高突变体 矮杆突变体 2. 生育期性状突变体 早熟突变体 3. 产量性状的突变体 4. 育性性状突变体 不育系的筛选 5.优良恢复系突变体 第五节 （二）、品质改良方面 1. 蛋白含量变异体 2. 储藏蛋白变异体 3. 氨基酸含量突变体 氨基酸代谢受末端产物的反馈抑制调控，筛选出对某种氨基酸的反馈抑制不敏感的突变体，其体内这种氨基酸的含量便有可能提高。 Carlson（1973）首次证明了这种可能性，筛选出的抗蛋氨酸类似物的烟草突变体，其蛋氨酸含量比对照高5倍 第五节 （三）、抗性改良方面的应用 1、抗病突变体的筛选 刘成运等[1994]以白叶枯病菌毒素为选择压，获得了抗白叶枯病突变体。 张献龙等（1995）以棉花黄萎病病菌毒素为选择压获得了黄萎病体抗性体细胞突变体. 2、抗盐突变体的筛选 Oono等[1