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微生物应用技术 曹理想 中山大学生物化学系 主要内容： 前言 微生物多样性与微生物资源开发技术 发酵培养与下游技术 育种技术 检测技术 药物筛选技术 细菌生物膜与细菌信号传导 燃料电池与生物传感器 生物转化技术 疫苗 前言 微生物的特性： 1、体积小、面积大 2、吸收多、转化快 3、生长旺、繁殖快 4、易变异、适应强 5、种类多、分布广 第一章 微生物多样性与微生物资源开发利用 1 微生物多样性 分类多样性： 古细菌（产甲烷细菌、极端嗜盐菌、极端嗜热菌） 真细菌（有11个分支，目前在生物技术上重要的菌种属于革兰氏阳性菌与紫细菌） 紫细菌（蛋白细菌 proteobacteria) 包括紫色光合细菌与非光合型的革兰氏阴性菌，分为四个亚门（α、β、γ、δ） α亚门：土壤杆菌属、根瘤菌属、立克次氏体属 β亚门：硫杆菌属 γ亚门：肠杆菌科及某些假单胞菌 革兰氏阳性菌 低GC含量的多为梭菌、芽孢杆菌、乳酸菌、葡萄球菌等 高GC含量为放线菌群微生物，有三类： 1、长而细的杆状细菌（节杆菌属、纤维单胞菌属）与球状的微球菌属 2、棒状杆菌—分枝杆菌—诺卡氏菌 3、链霉菌属及其近缘种 1 微生物多样性 分类多样性 功能多样性 化学多样性（代谢物结构多样性） 2 微生物资源开发利用 2.1 历史 1、酿酒业、面包业 2、50－60年代，大规模开发与发酵工业兴起 目前利用方式： 1、微生物菌体利用 2、微生物代谢物利用 3、微生物特性利用 4、其他（废物资源再利用、工业污染废物降解与净化） 2.2 微生物资源开发利用技术 在科学上荣誉属于那些征服世界的人，而不属于首先产生这种观念的人，著名人物往往是征服了世界的人们—他们发展一种技术、一种工具，或者提出一个受到普遍采纳的概念，或清楚地解释他们的发现，从而促进科学的发展和繁荣。 2.2 微生物资源开发利用技术 1、显微镜技术 2、无菌技术 3、纯种分离技术 4、纯培养技术 5、通气搅拌的好气性发酵工程技术 6、人工诱变育种与代谢控制发酵工程技术 7、发酵动力学、发酵的连续化自动化工程技术 8、微生物酶反应生物合成和化学合成反应相结合 纯培养技术与科赫法则的不足 不了解病毒 两种以上微生物在致病方面与干酪发酵过程的协同作用 对海洋微生物、瘤胃微生物、肠道微生物的研究需掌握微生物类群的生态关系 9 其他微生物研究技术 维诺格拉德斯基 分离到硫细菌、铁细菌与硝化细菌；设计硅胶平板并改进直接观察土壤微生物的技术。 贝格林克 证实蓝藻具有固氮能力，分离出根瘤菌纯培养，证实TMV通过植物汁液传播 其他微生物研究技术 伊万诺夫斯基 证知TMV的存在，发现超显微微生物世界 梅契尼科夫 细胞免疫 P. Ehrlich 体液免疫、并提出化学治疗概念 10 微生物药物研究历史 弗莱明 Wansman 链霉素 Chain （半合成抗生素）6-APA; 7-ACA; 7-ADCA 梅泽滨夫 提出酶抑制剂概念 酶抑制剂 Bestatin可抑制蛋白酶活性，可增强免疫反应 洛伐他丁与普伐他丁为HMG-CoA还原酶抑制剂，降低血液胆固醇浓度 免疫抑制剂环孢菌素A，FK506，雷帕霉素 受体拮抗剂 aspercilin与L－156 当前寻找药物的热点： 建立新的筛选模型，寻找新活性物质 利用基因工程技术构建产生新次级代谢物的工程菌 扩大微生物来源 应用定向生物合成和突变生物合成的原理寻找新的代谢物 对已知化合物进行化学改造 11 厌氧菌研究技术 烛罐培养技术 钢丝绒技术、厌氧转管法和预还原技术 瓶皿法及厌氧手套箱 厌氧菌的种类 根据对氧气的耐受性，分为三类：专性厌氧菌、微需氧菌与兼性厌氧菌。 专性厌氧菌指不能利用分子氧作为电子终末受体，只能在低氧分压、低氧化还原电位下才能生长的细菌，分为三类： 1、极端厌氧菌：空气中10分钟立即死亡 2、中等厌氧菌：空气中60－90分钟死亡 3、耐氧厌氧菌：有氧条件下生长差、厌氧条件下生长好 微需氧菌指在5％－10％CO2条件下才能生长很好的细菌，如弯曲菌、乳杆菌。 12 分子细菌学研究 从分子的、基因的、基因调控和表达的水平上研究细菌生命活动的基本现象和原理。 分子细菌学与普通细菌学的区别 分子细菌学 基因型 现象与导致原因 化学本质的，基因产物修饰水平上 普通细菌学 表型 现象 细胞的，至多在某种因子水平 分子细菌学与普通细菌学的区别 在细菌分类、鉴定方面 细菌毒力因子和致病机制 菌苗发展 细菌与环境 分子微生态学 分子细菌学研究方法 以普通细菌学的观察为基础 把表现型－基因型－基因产物联系起来 基因缺失技术是研究基因功能的最佳方法 电子计算机技术 基因和菌株的改造 13 细菌基因组学 核苷酸和氨基酸的相似性和同源性不一定意味着功能的相似性 几种菌的纯培养分离方