兔主动脉平滑肌细胞低密度脂蛋白受体相关蛋白和载脂蛋白E的诱导表达调节及和动脉粥样化的关系.pdf

兔主动脉平滑肌细胞低密度脂蛋白受体相关蛋白 及其与动脉粥样硬化的关系 中文摘要 receptor· f低密度脂蛋白受体相关蛋白(10wdensitylipoprotein relatea 是一种多功能的细胞膜表面受体。LRP配体包括：富含载脂蛋白E (ApoE)的脂蛋白、a，．巨球蛋白和蛋白酶的复合物、纤溶酶原激活剂 等。LRP配体的广泛多样性提示它与机体的多种生理、病理过程(如 脂蛋白代谢、动脉粥样硬化(As)的形成、细胞迁移、免疫应答和 Alzheimer’S病等)密切相关。 载脂蛋白E(ApoE)是血浆脂蛋白的主要组成部分，也是肝内外 主要配体，故ApoE作为血浆中的一种主要载脂蛋白，对于维持脂蛋 白的结构和调节几种不同脂蛋白代谢显得至关重要。巨噬细胞(M巾) 是As斑块中泡沫细胞的来源之一，它有较强的分泌ApoE的能力，我 中转变为泡沫细胞。 血管平滑肌细胞(SMC)是As斑块形成中起关键作用的细胞之 一，尤其是在As病变进展期，病变中的泡沫细胞主要由SMC转变形 成。但对于SMC转变为泡沫细胞的分子机制，国内外研究甚少。据文 献报道，在人As病变周围的正常SMC上有LDL受体和LRP的表达， 垦鎏匡型奎堂：堕圭堡壅圭婆塞 但在病变部位的SMC上无LDL受体的表达，而LRP表达增强，己知 LDL受体受细胞内胆固醇的下调，推测可能有某些因素使LRP表达增 强。另有文献报道，SMC也可分泌ApoE，且在动脉粥样硬化斑块组 织中出现ApoE的表达。故本研究旨在运用生物化学、分子生物学和 免疫组织化学的方法探讨LRP和ApoE在SMC摄取脂蛋白脂质转变 为泡沫细胞中所起的作用，以期阐明As病变中SMC来源的泡沫细胞 的形成机制，为As的防治提供重要的理论基础。本文分五个部分，分 ／ 、 述如下。)，’7 ／ 。 、第一部分五种脂蛋白及胆固醇对兔主动脉平滑肌 细胞LRP的诱导表达调节)…一钆一 目的研究五种脂蛋白及胆固醇能否诱导兔主动脉平滑肌细胞表达高 ’一———； 水平的LRP。 √C一一 ，方法在兔主动脉平滑肌细胞(SMC)培养基中分别加入正常LDL 和配体结合实验检测SMC上LRP的mRNA和蛋白质水平的表达。 结果五种脂蛋白均能诱导兔主动脉平滑肌细胞的LRP表达，尤以富 用胆固醇单独或与脂蛋白共同温育SMC后，发现胆固醇本身可促进 SMC的LRP蛋白水平的表达，脂蛋白与胆固醇的共同刺激作用更为 显著。一： 肘SMC上LRP的表达有上调作用，其机制可能主要是通过其中的胆 固醇来实现的。 ∥第二部分LRP在兔主动脉平滑肌细胞结合和摄取 脂蛋白中的作用‘ ： 目的探讨LRP在SMC结合、摄取脂蛋白中所起的作用。 或4C，温育5h后，用荧光分光光度法检测SMC结合、摄取标记脂 蛋白的量的变化。然后用不同浓度(O～100ug／m1)的非标记脂蛋白和 摄取实验，观察SMC结合和摄取FITC．Lactoferrin量的变化。 结果通过正向竞争抑制实验发现，Lactoferrin作为LRP的特异配体， 的作用尤为显著。反向竞争抑制实验发现随着培养液中非标记脂蛋白 的作用最明显∥一』 ／ OX—VLDL和OX_L唑 (‘第三部分五种脂蛋白对兔主动脉平滑肌细胞内 脂质堆积的影响及其机制)一一t。 嗍 OX—VLDL)对兔主动脉平滑肌细胞脂质堆积的影响并初步探讨其机 制。≈一 园遗匡叠盍堂—兰堡鲤窒篁笪望二—==========：一 NaOH 裂解细胞，按Folch等方法抽提SMC内脂质，测定TG及TC含量。 结果五种脂蛋白均能引起SMC中TC、TG堆积，对TC浓度的影响， 五种脂蛋白致SMC脂质堆积，从而转变为泡沫细胞。 父第四部分五种脂蛋白对兔主动脉