MDR1 siNA对结肠癌细胞多药耐药性的逆转作用.pdfVIP

MDRI siRNA对结肠癌细胞多药耐药性的逆转作用 中文摘要 MDRl siRNA对结肠癌细胞多药耐药性的逆转作用 专业名称： 内科学 博士研究生： 夏忠胜 导师： 朱兆华教授 中山大学附属第二医院消化内科 中文摘要 前言 结肠癌是消化道常见肿瘤，在西方国家，结肠癌在肿瘤致死的病因中居第 二位，仅次丁二肺癌。在中国，近20年来，结肠癌的发病率不断上升，结肠癌与 肺癌及乳腺癌成为中国增长最快的三种肿瘤。目前其发病率已达60／10万人口， 死亡率近8／10万人口．大多数结肠癌患者就诊时都是中晚期，结肠癌细胞已发 生转移，因此单纯外科手术切除对中晚期结肠癌患者达不到根治的效果，必须辅 以化疗。但迄今为止，大多数化疗药的疗效有限，目前临床上结肠癌疗效最好的 联合化疗方案其有效率也不到50％，而且，在这些不到50％有效的结肠癌患者 中，在化疗缓解停用化疗药一段时间后，大部分又复发，究其原因是因为结肠癌 Resistance，MDR)． 细胞对化疗药产生了多药耐药性(Multi-drug 肿瘤细胞经典的MDR与一种分子量为170kDa的膜糖蛋白，P．糖蛋白 内化疗药的累积浓度。P-gp的过表达已被证实与结肠癌细胞的MDR有关。 为提高结肠癌治疗中的化疗效果，一个主要的问题是如何逆转结肠癌细胞 的多药耐药性。以往的研究发现钙拮抗剂如维拉帕米、反义寡核苷酸及锤头核糖 酶等能降低细胞MDRI mRNA和P-印的表达水平从而部分逆转肿瘤细胞 MDRI／P-gp依赖的多药耐药性。但钙拮抗剂存在导致心衰及低血压等心血管副 作用，而反义寡核苷酸和锤头核糖酶的临床应用价值还未得到完全证实。因此， 仍有待寻找新的方法来逆转肿瘤细胞的多药耐药性。 近年发现的一种抑制特异基因表达的新方法是采用RNA干扰(RNA MDRI siRNA埘结肠癌细胞多药耐药性的逆转作I}】 中文摘要 用，siRNA与RNA诱导的沉默复合物(RNAinduced silencingcomplex，RISC) 结合而活化RISC，其中的反义链以高度的序列特异性方式作用丁二靶mRNA，进 而降解mRNA。 本研究中，我们选择COLO320DM结肠癌细胞来探讨siRNA对结肠癌细胞 及Vincristine三种抗肿瘤药来观察RNA干扰效应对结肠癌细胞多药耐药性的影 响。 siRNAs转染结肠 在瞬时转染实验部分，本研究采用两种人工合成的MDRI 癌细胞，观察MDRIsiRNAs能否抑制结肠癌细胞MDRl mRNA和P-gp的表达。 并进一步观察转染MDRIsiRNAs及联合应用抗肿瘤药后，结肠癌细胞在细胞生 长、细胞动力学及细胞内药物累积浓度等方面的变化。 在稳定转染实验部分，用siRNA表达载体转染COLO320DM结肠癌细胞， blot鉴定筛选阳 采用G418筛选稳定转染的克隆细胞，并采用RT-PCR及Western 性克隆细胞。从阳性克隆细胞中选择代表性克隆用f基因沉默效应的进一步观 察，包括MDRI mRNA的表达、P-gp的表达、IC50测定、细胞动力学分析及细 胞内抗肿瘤药累积浓度的测定等。 研究目的 探讨MDRIsiRNA对结肠癌细胞多药耐药性的逆转作用。