微生物总结要点.ppt

微生物学研究技术进展 观察工具、培养接种技术、鉴定检测技术、育种保种技术等方面 食品微生物学的研究任务：四个方面 食品微生物种类： 有益微生物的应用形式：五种 微生物分类方法 1.传统分类法（classical classification） 以细菌的形态和生理生化特征为依据。 2.数值分类法（numerical classification） 20世纪60年代兴起，细菌的各种生物学性状“等重要原则”分类，性状数量超过50个。 3.种系分类或自然分类(natural calssification) 以细菌大分子物质（核酸、蛋白质）结构的同源程度进行分类。 微生物的鉴定 常规鉴定方法： 形态学鉴定（群体形态特征、个体形态特征） 生理生化反应试验（种类） 半自动或全自动微生物鉴定仪————微量生化反应试验；采用数值分类原理。 分子遗传学分类鉴定方法 16srRNA序列和16s-23s-rRNA间区序列分析 微生物全基因组测序 GB4789.10-2010第一法：金黄色葡萄球菌定性检验 第二法：金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数 第二法：金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数 第三法：金黄色葡萄球菌MPN计数 在Baird-Parker 平板上的菌落特征 金黄色葡萄球菌的检测 有高度耐盐性，可在10- 15% NaCl肉汤中生长。 产生血浆凝固酶（Coagulase） 血浆凝固酶是能使含有枸椽酸钠或肝素抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类物质，致病菌株多能产生，常作为鉴别葡萄球菌有无致病性的重要标志。 沙门氏菌检验程序 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 胶体金标记 酶标记抗体（抗原）技术（免疫酶技术） 是利用抗原抗体的特异性结合和酶的高效特异的催化作用显色而建立起来的免疫检测技术。 常用的标记酶是辣根过氧化物酶（HRP），其作用底物为过氧化氢，催化时需要供氢体，常用的供氢体有3，3′-二氨基联苯胺（DAB）和邻苯二胺（OPD），前者反应后形成不溶性的棕色物质，适用于免疫酶组化法；后者反应后形成可溶性的橙色产物，敏感性高，易被酸终止反应，呈现的颜色可数小时不变，是ELISA中常用的供氢体。 酶标记抗体（抗原）技术（免疫酶技术） 直接法 用酶标记抗体直接处理含待检抗原的标本，洗涤后浸于含有过氧化氢和DAB的显色反应液中作用，然后在普通光学显微镜下观察颜色反应，抗原所在部位呈棕黄色。 间接法 含待检抗原的标本先用未标记的抗血清处理，洗涤后再用相应的酶标记抗抗体处理，洗涤，然后浸于含有过氧化氢和DAB的显色反应液中作用，普通光学显微镜下观察颜色反应，以指示是否有抗原-抗体-抗抗体复合物存在 。 酶联免疫吸附试验（简称ELISA） 将抗原或抗体吸附于固相载体的表面，酶标记物与相应的抗体或抗原反应后，形成酶标记抗原抗体复合物，在遇到相应底物时，结合物上的酶催化底物产生水解、氧化或还原等反应，从而生成可溶性或不溶性的有色物质，可用肉眼或酶标测定仪判定结果。颜色的深浅与相应的抗体或抗原量成正比，因此，可根据颜色的深浅来定量抗体或抗原。 生物素-亲和素免疫放大技术 生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin System BAS) 特点： 具有高灵敏度、高特异性、高稳定性和适用性等特点。生物素易与蛋白质和核酸类等生物大分子结合，再和生物素衍生物结合，将信号多级放大，能保持大分子物质的原有生物活性。亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性，不增加非特异性干扰，也不会因反应试剂浓度高低受影响。酸、碱、变性剂及有机溶剂均不会影响亲和素与生物素的结合力。其稳定的结合。 中和试验　　 病毒或毒素与相应抗体结合后，丧失了对易感动物、鸡胚和易感细胞的致病力，称为中和试验。 分子生物学检测方法 PCR技术 PCR(polymerase chain reaction)即聚合酶链反应技术，是指利用耐热DNA聚合酶的反复作用，通过变性-延伸-复性的循环操作，在体外迅速将DNA模板扩增数百万倍的一种操作技术。 理论上可在2小时内将一个DNA分子扩增到106-109倍，从而大大提高了对其进行分析研究的速度。 以致病菌属或种特异核酸序列的互补序