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微量元素铜对人口腔癌细胞的影响 硕士研究生： 王 芳 指导教师： 潘巨利 教授 指导小组： 高锦 研究员 专业名称· 口腔基础医学 摘 要 背景：恶性肿瘤严重威胁着人类的生命与健康，临床上常用的治 疗方法是手术，放射治疗，化学药物治疗或这几种方法的综合治疗。 手术与放疗对肿瘤远处转移的癌细胞作用甚微，化疗虽可以杀伤肿瘤 细胞，但受其耐药性所限，常导致肿瘤复发。铜是真核细胞中必须的 金属元素，与肿瘤密切相关，研究发现很多类型的肿瘤患者的血清中 含有异常高水平的铜，而且在化疗过程中同样伴随着铜水平的变化； 近年来的研究又发现铜与化疗药物顺铂(DDP)关系密切，铜的吸收 铜后可能影响化疗疗效，但肿瘤发生过程中铜在体内分布和代谢的异 常对原发肿瘤患者化疗疗效的影响未见报道。 目的：本实验通过药物筛选，检测细胞凋亡等技术手段从细胞水 平研究铜对DDP介导的口腔癌细胞化疗反应的影响及其可能机理，为 肿瘤临床化疗提供新的科学依据和启示，开辟新的治疗方案。此外， 本实验还利用绿色荧光蛋白(GFP)作报告基因，积极开创一种新型 的快速高效的研究药物处理后的细胞生存能力的方法。 方法：以口腔恶性肿瘤化疗药物顺铂(DDP)为例，采用Sigma 公司生产的醋酸铜，以不同组织来源的口腔肿瘤细胞株作为研究对象 人涎腺)。采用MTT法观察铜对肿瘤细胞的影响，利用流式细胞术分 析铜对DDP介导的细胞凋亡和细胞周期的影响；以GFP为代表，采用 脂质体法将重组质粒HSP／GFP转染到口腔肿瘤细胞中，用G418持续 筛选阳性克隆进行扩大培养。 结果：MTT显示当醋酸铜浓度在20～400蝴范围时，对三株口腔 癌细胞的生存率抑制显著。25pM铜联合DDP处理细胞，加铜后显著 胞的抑制作用。对于Ace一3细胞，随着DDP浓度增加肿瘤细胞出现两 种不同的结果：当DDP浓度小于25pM时，25Ⅲ的醋酸铜促进了DDP 对细胞的抑制，当DDP浓度大于25州时，25心的醋酸铜降低了DDP 13细胞的IC50 对细胞的抑制。用25州铜加DDP联合处理细胞，Tca81 0．71)州几。用流式细胞术分析铜对DDP介导的细胞凋亡和细胞周期 的影响，结果显示25州铜加强了7．5州DDP引起的肿瘤细胞凋亡， DDP引起的细胞凋亡；用7．5州DDP处理细胞， 但轻微降低了25PM 加25煳铜后抑制细胞向S期移动；用25州DDP处理细胞，加25c州 铜后促进细胞向s期移动。重组质粒HSP／GFP转染肿瘤细胞后，36小 时后在42。C热休克3小时即可以马上观察到绿色荧光，将细胞培 养过夜后，转染效率和荧光强度显著增强，绿色荧光可以持续4天。 用G418连续筛选40天可以得到稳定表达的阳性克隆。 结论：铜增强了小剂量DDP对肿瘤细胞的抑制；小剂量铜能增强 DDP诱导的细胞凋亡，改变细胞周期；利用G418筛选HSP／GFP转染 的肿瘤细胞，能够建立一种高效的筛药体系。 口腔肿瘤 凋亡7 转染 关键词： 铜DDP ·2· on of on ofDDP Theinfluence cytotoxicity copper cells oralcarcinoma Fang Postgraduate：Wang